Analyysit> Mikroskooppiset (bakterioskooppiset) Gram-iskutestit infektoivien ja tulehduksellisten prosessien diagnoosissa

Tiedot julkaistaan ​​sivustolla vain viitteenä. Muista neuvotella asiantuntijan kanssa.
Jos löydät virheen tekstistä, virheellisestä palautteesta tai virheellisestä tiedosta kuvauksessa, ilmoita siitä sivuston ylläpitäjälle.

Tämän sivuston julkaisemat arvostelut ovat niiden henkilöiden henkilökohtaisia ​​mielipiteitä, jotka ovat kirjoittaneet ne. Älä itse lääkitä!

Suhtaudu naisen kasvistoon: mikä määrää sen, nopeuden ja patologian

Smear on flora - usein nimittää gynekologien analyysi. Mitä hän näyttää ja millaisia ​​väärinkäsityksiä hänen tililläan?

Tätä analyysiä voidaan kutsua "yleiseksi". Tämä on ensisijainen diagnoosi, jonka avulla lääkäri voi vahvistaa tai kieltää tulehdusprosessin läsnäolon emättimessä, virtsaputkessa, kohdunkaulan kanavassa ja myös tehdä tiettyjä johtopäätöksiä potilaan mahdollisista vaihdevuosista tai kliimcterisista muutoksista.

• mikroskooppinen (bakterioskooppinen) Gram-tahrainen tahra on virallinen nimi;
• sukupuolielinten tahra;
• bacterioscopy;
• Mikroskopia.

Käytetään tarttuvien ja tulehdusprosessien diagnosointiin. Bakteeroskopian avulla voit havaita bakteereja naisen sukupuolielimissä: yksinkertaisimmat mikro-organismit - gonokokit, jotka aiheuttavat gonorrhea, trichomonas - aiheuttavan aineen trichomoniasis. Myös mikroskoopin asiantuntija näkee bakteereja, sieniä (Candida), avainsoluja (bakteerivinogeenin merkki). Mikro-organismin tyyppi määräytyy sen muodon, koon mukaan, myös siitä, onko se värjätty värillä vai ei, eli grampositiivisella tai gram-negatiivisella.

Lisäksi jokaisesta pisteestä (otettu emättimestä, virtsaputkesta, kohdunkaulan kanavasta) lasketaan leukosyyttien määrä näkökenttältä. Mitä enemmän heistä - sitä voimakkaampaa tulehdusprosessi. Arvioitu määrä epiteeliä ja limaa. Litteä epiteeli on erityisen runsaasti lisääntymisikäisiä naisia ​​ovulaation aikana - kuukautiskierron keskellä.

• emätin kandidiaasi (kutina);
• bakteeriservinoosi (aiemmin kutsuttu gardnerelloosi);
• tippurin;
• trichomoniasis.

Jos yhdestä näistä taudeista ei ole selkeitä merkkejä, mutta tahra on huono, tehdään perusteellinen materiaalin tutkimus.

Syyt suvun suorittamiseen gynekologiassa

1. Jos märkä tai suuri määrä leukosyyttejä on märkä, mutta tartunnan aiheuttaja ei ole tiedossa. Koska mikroskoopilla mikro-organismien havaitsemisen alaraja on 10 - 4 - 10 - 5 astetta.
2. Jos havaitaan mikrobi, määritetään sen herkkyys antibiooteille.
3. Jos sieni-infektiota esiintyy. Määritä tarkasti sienten tyyppi ja määrätä tehokas antimykoottinen lääke.

Muuntyyppisiä sieniä Candidaa ei voida hoitaa, jos patologisia oireita ei ole.

Jos avainsoluja löydetään (bakteerivinogeenin merkkejä), mutta myös muita mikrobeja esiintyy. Tunnistamiseksi.

Mitkä ovat eroavuudet, kasvustojen tahra ja emättimen puhtausaste?

Tutkimusmenetelmässä. Yleisillä tahroilla lasin päälle laskeutuva materiaali värjätään erityisillä väriaineilla ja katsellaan mikroskoopilla. Ja kun tehdään bakteriologinen (herneenviljely, kulttuuri, mikrobiologinen tutkimus), se ensin kylvetään ravintoalustalle. Ja sitten, muutaman päivän kuluttua, he katsovat mikroskoopin alle - mistä mikro-organismikasvot ovat kasvaneet.

Eli jos puhumme nimenomaisesta analyysistä, sinulle annetaan lausunto vain leukosyyttien, epiteelin ja limaosan määrästä. Kylvö ei ole kiireellinen

Myös mikroskopialla voit nopeasti määrittää emättimen puhtausastetta. Tässä lääkäri arvioi normaalin, ehdollisesti patogeenisen ja patogeenisen mikrofloorin välisen suhteen.

Emättimen puhtauden klassinen arviointi.

Mitä lääkärit eivät näe mikroskoopilla

1. Raskaus. Sen määrittämiseksi ei ole tarvetta tahraa ja mitä tulosta se näkyy. Sinun on läpäistävä verikoke hCG: lle, suorittava gynekologinen tutkimus lääkäriltä tai kohtuun kuuluvasta ultraäänestä. Voit tunnistaa kori-gonadotropiini virtsasta, mutta ei sukupuolielinten vastuuvapaudesta!
2. Syöpä kohdun ja kohdunkaulan. Endometriumin pahanlaatuisen degeneraation diagnosoimiseksi tarvitaan histologista materiaalia ja suuria määriä. Ja ota se suoraan kohdusta erillisellä diagnostiikkakirurgialla.

Kohdunkaulan syöpä ja muut sairaudet (eroosio, leukoplakia, koilosytoosi, HPV-vauriot, epätyypilliset solut jne.) Perustuvat sytologisen tutkimuksen tuloksiin. Tämä analyysi otetaan suoraan kohdunkaulasta transformaatiovyöhykkeestä tietyn menetelmän mukaan Papanicolaou-värjäyksellä (tästä syystä analyysin nimi - PAP-testi). Sitä kutsutaan myös onkosyytologiaksi.

Ensimmäiset neljä infektiota diagnosoidaan PCR: llä. Immunogeenisuusviruksen läsnäolon määrittäminen paksuisella tarkkuudella on mahdotonta. Sinun on läpäistävä verikoke.

Miten valmistautua analyysiin ja milloin sitä tarvitaan

Lääkäri ottaa potilaan tahroja gynekologisella tuolilla (riippumatta siitä, onko hän raskaana vai ei) käyttämällä erityistä harjaa tai Volkmannin steriiliä lusikkaa. Se ei haittaa lainkaan ja hyvin nopeasti.

On teknisesti mahdollista saavuttaa hyvä, jopa täydellinen tahra, jos puhdistat emättimesi esimerkiksi klooriheksidiinin tai miramistiinin kanssa. Mutta mistä on kyse?

• suihku;
• olla seksiä;
• käytä mitä tahansa emättimen hygieniatuotteita, intiimiä deodorantteja ja lääkkeitä, jos lääkäriä ei ole määrätty;
• tee ultraääni käyttäen emättimen koettimia;
• tehdään kolposkopia.
• ennen kuin vierailet gynekologi tai laboratorio, 3 tuntia, sinun ei tule virtsata.

Lahjoituksen aivohalvaukset tarvitsevat kuukautisvuodon verenvuotoa. Vaikka kuukautiskierroksen viimeisenä päivänä olisi vain "petosta", on parempi lykätä tutkimusta, koska tulos on todennäköisesti huono - suuri määrä valkosoluja paljastuu.

Alkoholin saanti ei ole kielletty.

Voinko ottaa smetian antibiooteilla tai heti hoidon jälkeen? Ei ole toivottavaa tehdä tätä 10 päivän kuluessa lääkkeen paikallisen vaikutuksen (emättimen) ja kuukauden kuluttua antibakteeristen aineiden käytön suun kautta.

Mikroskooppinen tutkimus määräsi:

• rutiininomaisesti gynekologin vierailulla;
• maahanpääsyn yhteydessä gynekologiseen sairaalaan;
• ennen IVF;
• raskauden aikana (varsinkin jos tahra on usein huono);
• jos on valituksia: epätavallinen purkautuminen, kutina, lantionkipu jne.

Tulosten tulkinta: mitkä ovat normit, ja mitä - patologia mikrofloorassa

Aluksi mainitsemme taulukon, jossa ns. Ensimmäisen puhtaustason osoittimet näkyvät. Virtsaputkea ei mainita siinä (vaikka materiaali on myös otettu sinne), koska puhumme gynekologisista sairauksista. Virtsaputken tulehdusprosessi hoidetaan urologilla.

Epiteeli - epiteelisolujen määrää ei lasketa, koska sillä ei ole diagnostista arvoa. Mutta liian vähän epiteelistä puhutaan atrofisesta raskaudesta - se tapahtuu naisilla vaihdevuosien aikana.

Leukosyytit - katsotaan "näkökulmasta":

• enintään 10 - pieni määrä;
• 10-15 - kohtalainen määrä;
• 30-50 - suuri määrä, nainen huomaa patologiset oireet, ja lääkäri tutkiessaan diagnosoi tulehdusprosessia emättimessä ja (tai) kohdunkaulassa.

Mukuli (lonkka) - normaalisti pitäisi olla läsnä, mutta suuri määrä tulehduksen yhteydessä tapahtuu. Virtsaputken liman ei pitäisi olla.

Bakteeriflora tai gr laktomorphotyypit - normi, se on emättimen suoja bakteereilta.

Trichomonas, gonokokit ja avainsolut terveillä naarailla kohdunkaulalla ja emättimellä eivät saisi olla. Candida on myös poissa. Ainakin merkittävä määrä, joka havaitaan kasviston analyysissä.

Soveltuvuuspinta ei ole suuri. Mutta jos nainen tulee sairaalaan, hän ottaa tuoreen täältä oikealla paikallaan alustavan tutkinnan aikana.

Tulokset ovat yleensä voimassa 7-14 päivää. Siksi, jos haluat siirtää sen ennen toimenpidettä, tee se 3 päivää ennen sairaalaan ottamista. Viimeinen osoitetuista testeistä.

Mitä löytyy bacpossevestä

Gynekologi pystyy dynaamaan kulttuurintutkimuksen tuloksen parhaimmillaan. Mutta itse, jos luet alla olevia tietoja, kokeile alustavasti analyysisi.

Mikro-organismien määrä voidaan ilmaista "risteyksillä":

• "+" On pieni määrä;
• "++" on kohtuullinen määrä;
• "+++" on suuri määrä;
• "++++" - runsas kasvisto.

Mutta useammin mikroflora-edustajien määrä ilmaistaan ​​asteina. Esimerkiksi: Klebsiella: 10-4 astetta. Muuten tämä on yksi enterobakteerien edustajista. Gram negatiivinen tuova, aerobinen mikro-organismi. Yksi vaarallisimmista taudinaiheuttajista, vaikkakin se on vain opportunisti. Tämä johtuu siitä, että Klebsiella on vastustuskykyinen (kestävä) useimpiin antibakteerisiin aineisiin.

Alla kuvataan muita yhteisiä termejä, jotka löytyvät tutkimuksen tuloksista, tai voit kuulla lääkäriltä.

Soor - on candida tai jollakin muulla tavalla - nielu. Sitä hoidetaan antimykoottisilla (antifungaalisilla) lääkkeillä.

Hiivapitoiset sienet blastosporit ja pseudomycelium - kandidiaasi tai muu sieni-tauti, jota tavallisesti käsitellään samaan tapaan.

Difteroidit - ehdollisesti patogeeniset mikro-organismit, tutkijoiden tutkimustulosten mukaan useimmissa naisissa noin 10% mikrofloraista ovat ne samoin kuin streptokokit, stafylokokit, E. coli, gardnerella. Jos kasvisto häiriintyy, niiden määrä kasvaa.

Leptotrix on anaerobinen gram-negatiivinen bakteeri, joka aiheuttaa leptotrikoosia. Lue lisää tästä artikkelista.

Mixed flora on normin muunnos, jos taudin oireita ei ole, kokonaan leukosyytit tai niiden voimakas lisääntyminen (40-60-100). 15-20 on normin muunnos, erityisesti raskauden aikana.

Enterokokit (Enterococcus) ovat suoliston mikrofloora, joka joskus pääsee emättimeen. Gram positiiviset cocci. Tietoja Enterococcus fecaliksesta (Enterococcus faecalis) kirjoitimme aikaisemmin. On myös enterococcus coli - E. coli. Yleensä aiheuttaa epämiellyttäviä oireita yli 10 asteen pitoisuudessa 4 asteessa.

Pseudomonas aeruginosa on gram-negatiivinen bakteeri. Usein vaikuttaa henkilöihin, joilla on vähäinen koskemattomuus. Se on hyvä vastustuskyky antibiooteille, mikä vaikeuttaa käsittelyprosessia.

Polymorfinen bacillus on emättimen biocenoosin yhteinen edustaja. Jos leukosyyttien määrä on normaali eikä valituksia ole, sen läsnäolo ei saisi häiritä.

Erythrosyytit - voivat olla pieniä määriä tahroja, varsinkin jos ne on otettu tulehdusprosessin aikana tai kun pieniä tarkkailua on tapahtunut.

Coccus tai coccobacterial flora - yleensä tarttuvan prosessin emättimessä tai kohdunkaulassa. Jos naisella on valituksia, tarvitaan antibakteerista hoitoa - emättimen debridement.

Diplococci on eräänlainen bakteeri (cocci). Pienellä määrällä ei tuoda haittaa. Paitsi gonokokkov - patogeenien gonorrea. Häntä hoidetaan aina.

Ja lopuksi mainitsemme usein lyhenteitä, jotka on kirjoitettu analyysitulosten aihioon:

• L-leukosyytit;
• Ep - epiteeli;
• Pl. ep. - squamous epiteeli;
• Gn (gn) -monococcus, gonorrean aiheuttaja;
• Trich - trichomonas, trichomoniasian aiheuttaja.

Grammalla

Biologia ja lääketiede

Soluseinän rakenteesta riippuen eubakteereihin kuuluvat prokaryootit jaetaan kahteen suureen ryhmään. Todettiin, että jos kiinteät eubakteerisolut käsiteltiin ensin kristalliviolilla ja sitten jodilla, muodostui värillinen kompleksi. Kun jatkuva hoito alkoholilla soluseinän rakenteesta riippuen, kompleksin kohtalo on erilainen: ns. Gram-positiivisissa lajeissa tämä solu säilyttää kompleksin ja jälkimmäiset pysyvät värjäytyneinä gram-negatiivisissa lajeissa, päinvastoin, maalattu kompleksi pestään soluista ja ne muuttuvat värjäytyneiksi. (Tätä menetelmää ehdotti ensin 1884 Tanskan tutkija H. Gram (Ch. Gram), joka osallistui värjäysaineisiin ja myöhemmin sitä käytettiin bakteereihin).

Joissakin eubakteereissa positiivinen reaktio, kun värjätään edellä kuvatulla tavalla, on ominaista vain soluille, jotka ovat aktiivisen kasvun vaiheessa. Todettiin, että maalattu kompleksi on muodostettu protoplastiin, mutta sen solujen säilyttäminen tai sen liuottaminen sen jälkeen käsittelyn jälkeen alkoholiin määräytyy soluseinän rakenteellisten piirteiden perusteella.

Huumausaineiden värjäys lisää mikroskopian herkkyyttä, koska huokoiset bakteerit ovat huonosti erotettavissa jopa 400-1000 kasvulla.

Differentiaalinen Gram-väritys on yleisin, vaikkakin käytetään myös yksiväristä värjäytymistä. Gram-värjäys tekee mahdolliseksi erottaa bakteerit, joiden paksu soluseinä koostuu lähes kokonaan peptidoglykaa- nista (gram-positiivisista) bakteereista, joiden soluseinämä ohuen peptidoglykaanikerroksen lisäksi sisältää lipoproteiinien ja lipopolysakkaridien (gram-negatiivinen) ulomman membraanin. Pääväriaine (esimerkiksi kristallivioletti) on kiinteästi kiinnitetty gram-positiivisten bakteerien seinämään, jolloin ne ovat sinertävän mustia ja helposti pestävä gram-negatiivisten bakteerien seinämällä alkoholilla (tai asetonilla), jonka jälkeen ne värjätään värillisellä värillä (esim. Safraniinilla) punaisella.

Gram-värjäytyminen on välttämätöntä ysköskenteiden tutkimuksessa. Jos yskö on vastaanotettu oikein, vähintään 25 neutrofiilia ja alle 10 epiteelisolua nähdään näkökentässä pienellä suurennoksella. Suurempi määrä epiteelisoluja ja erilaisia ​​bakteerityyppejä osoittaa, että yskö on kontaminoitunut orofarynxin sisällön kanssa. Vaikka normaalia mikroflooria on usein vaikea erottaa patogeenisista bakteereista, Gramin tahrojen tahrat antavat arvokasta tietoa, jos patogeenisella bakteerilla on käytettävissään käytettävät indikaatiot (biologinen signaali). Esimerkiksi bakteerivaginoosissa grampositiivisilla bakteereilla pilkotut epiteelisolut ovat näkyvissä emättimessä.

Seulontatutkimuksena käytettiin ulosteiden kudoksen mikroskopia grammaisella värjäyksellä. Kun neutrofiilejä havaitaan, ne alkavat bakteriologista tutkimusta ja Clostridium difficile -bakteerin tuottamien toksiinien määritystä.

Gram-tahraa käytetään myös bakteerien ja valkosolujen tunnistamiseen CSF-, synovial-, pleura- ja peritoneaalisissa nesteissä. Menetelmän herkkyyden alaraja on 10 000 bakteeria per 1 ml.

Herkkyyden lisäämiseksi testattavaa nestettä sentrifugoidaan ja valmistetaan värillinen tahra. Tätä menettelyä kutsutaan rikastusmateriaaliksi. Se on yksinkertainen ja erityisen arvokas bakteerien ja valkosolujen havaitsemiseen CSF: ssä ja haponkestävissä bakteereissa ysköössä.

viitteet:

Yleisen bakteriologian menetelmät

Maalaus tekniikka smears. Värien värjäämisessä käytetään maaliliuoksia tai mustepaperia, kuten A.I. Sininen. Valmistuksen helppous, helppokäyttöisyys ja kyky varastoida mustepaperia rajattomasti olivat perusta niiden laajaan käyttöön erilaisissa värjämenetelmissä.

Värivaihtelut maalaus paperille. Kuivattuun ja kiinteään valmistukseen levitetään muutama tippa vettä, jonka koko on 2 kertaa2 cm. Koko värjäämisjakson aikana paperin tulee olla märkä ja kiinnittyä tiiviisti lasipintaan. Kuivauksen aikana paperi kostutetaan lisäksi vedellä. Smear-värjäytymisen kesto määräytyy värjäysmenetelmällä. Värjäyksen lopussa paperi poistetaan huolellisesti pihdeillä, ja pestään pestään vesijohtovedellä ja kuivataan ilmassa tai suodattimessa.

Värjäys tahrojen värjäysratkaisuilla. Väriaine levitetään kuivattuun ja kiinteään valmistukseen pipetillä niin paljon, että se peittää koko tahra. Kun väriaineita värjätään väriaineiden väkevöidyllä liuoksella (Zielyan karboli fuchsin, karbolinen gentian tai kristallivioletti), ne värjätään suodatinpaperilla, joka säilyttää väriainehiukkaset: suodatinpaperin kaistale asetetaan kiinteään tahraan ja väriaine liuos kaadetaan siihen.

Mikroskopista tutkimusta varten valmistetut tahrat, kuivatut ja kiinteät, altistetaan värjäämiselle. Väritys on yksinkertainen ja monimutkainen. Yksinkertainen väritys koostuu yhden maalin levittämisestä aivohalvaukselle tietyksi ajaksi. Useimmiten yksinkertaista vettä käytetään alkoholinvettä (1:10) Pfeiffer fuchsin, Leffler metyleenisininen ja safraniini. Eosiinia hapanta väriaineena käytetään vain värjäämään solujen sytoplasmaa ja sävyttämään taustaa. Sour magenta on täysin sopimaton bakteerien värjäämiselle.

Yksinkertaisella värjäämisellä mikrobi-elimet ymmärtävät värin värin, jota käytetään yhtä voimakkaasti kuin solun ytimet; samanaikaisesti sytoplasma ja tahrojen koko tausta (jos se ei ole pelkästään puhtaasta viljelmästä tehty tahra) maalataan samassa värissä, mutta hieman paljaammat. Fuchsin ja gentian violetti ovat voimakkaampia maaleja; metyleenisinistä tahrat paljon paljain. Värien käsitys ei riipu pelkästään maalien ominaisuuksista vaan myös värjäävien mikrobien ominaisuuksista. Suurin osa mikrobeista värjätään helposti ja nopeasti veteen tai alkoholin ja vesipitoisten maalien liuoksiin.

Kovavärjäys-mikrobeja (esimerkiksi tuberkuloosin aiheuttavaa ainetta) tai niiden osia (itiöitä, flagellaa jne.) On käytettävä tehokkaampia (pakotettuja) värjäysmenetelmiä.

Värjääminen on mahdollista pakottaa: a) lisäämällä emämaalien värjäyskykyä, b) pidentämällä väriaikaa ja c) suolakurssin vaikutuksella.

Värjäystehon nostamiseksi maali altistuu korkealle lämpötilalle (lämmitys), kunnes höyry ilmestyy (jopa kiehuva). Vaihtelemalla lämmitysaste on mahdollista saada eri värivahvuustasoja.

Värjäyksen vaikutuksen venyminen esineeseen voi myös jossain määrin parantaa värien astetta.

Mordants ovat aineita, jotka helpottavat väriaineen tunkeutumista soluihin: fenoli, tanniini, etikkahappo ja kromihapot, emäkset jne. Mordanttien vaikutusmekanismi on erilainen: joissakin tapauksissa mordantit toimivat väriaineina, toisissa taas solujen kyvyssä värin havaitsemiseen. Mordants toimivat tahraan joko ennen maalin vaikutusta (esimerkiksi värikynää värittämällä) tai yhdessä maalin kanssa (fenoli Tsili fuchsinissa) tai maalin vaikutuksen jälkeen (Lyugolevsky-liuos Gram-menetelmässä).

Maalausmaalauksia käytettäessä käytetään maalien lisäksi niin kutsuttuja valkaisu- tai väriaineita. Jälkimmäiset tarkoittavat ylimääräisen maalin poistamista koko mikrobikennosta tai sen osasta, kun maali on liian voimakas materiaalin adsorboimisessa tai maalattaessa sitä lämpöä jne.

Valkaisuaineina käytetään alkoholia, rikkihapon 5-prosenttista vesiliuosta, typpihapon 20 - 30-prosenttista vesiliuosta, 3-prosenttista kloorivetyhapon liuosta absoluuttisessa alkoholissa jne.

Maaleiden tahraamiseksi on välttämätöntä pitää työpöydälle joukko väriainejäämiä pulloissa (parempi kuin oranssi lasi) pipeteillä ja kumitölpillä. Pulloihin on merkittävä asianmukaiset merkinnät; Maalin tunnisteiden nopean kontaminaation välttämiseksi on suositeltavaa liottaa se sulaan parafiinilla (harjalla). Maalipulloja sijoitetaan puiseen jalustalohkoon (kuva 2).

Kuva 2. Maalipullot

Maalien ja huuhtelunesteiden pesemistä varten tarvitaan pullon, jossa on putki tislatulle vedelle ja muotin (tyhjennyskupin), jossa on sillan silta. Sillan jalusta koostuu kahdesta lasiputkesta tai tikkuista, jotka on liitetty päihin kumiputkien palasilla. Jalustan leveyden tulee olla pienempi kuin liukukappaleen pituus. Lisäksi karkaisuun tarvitaan alkoholi (tai kaasu) poltin ja Cornet-pinsetit mikroskooppilevyille. Kun maalaus lämmitetään, lasilevy tarttuu pinseteillä ja pidetään tietyn ajan liekin yli. Pidennettyjen väriaineiden tapauksessa ne käyttävät kyvettejä tai pieniä kuppeja, joissa ne kaada maali ja upottavat sen. Kun maalaa samanaikaisesti useita sävyjä kyvetissä, estäen silmälasit kiinni toisistaan, ne liitetään yhteen kahteen osaan likaantuneen puolen ulos ja vahvistetaan putkilla leikatuilla kumirenkailla. Värjäyksen jälkeen pyyhkimet pestään vedellä ja kuivataan perusteellisesti suodatinpaperilla.

Viime vuosien tekemä työ on paljastanut mahdollisuuden säilyttää mikrobien elinkelpoisuus, lähinnä spore-bearing, värjäytymisen aikana. Siksi on tarpeellista kiinnittää riittävästi aivohalvauksia. Pese vedet (kun värjätään), joka on valutettava erityiseen astiaan, minkä jälkeen neutraloidaan. Käytetyn suodatinpaperin (kuivumisen jälkeen) ei pidä hävittää, vaan polttaa, ja käytetyt tahrat on desinfioitava.

Yksinkertaiset maalausmenetelmät

Yksinkertaisella maalausmenetelmällä kaadetaan muutama tippa alkoholia tai vesipitoista maaliliuosta kiinteälle tahralle 1-2 minuuttia; Fuchsin (1:10) tai Leffler-metyleenisintä käytetään eniten tähän tarkoitukseen. Sitten maali pestään tislatulla vedellä ja kuori kuivataan kahden suodatinpaperiliuskan väliin. Tavallisesti fuchsin (1:10) väriä 10-30 sekuntia ja metyleenisininen - 2-10 minuuttia. Fuchsin-tahrat tahroivat voimakkaammin, ja kun ne värjätään metyleenisinisellä, saadaan hellävaraiset, tyylikkäät valmisteet. Suodatuspaperin kuivumisen jälkeen tapahtunut tahra on täysin kuiva, muussa tapauksessa, jos jäljelle jäävä kosteus tulee kosketukseen setriöljyn kanssa, muodostuu emulsio ja mikroskooppi johtaa hämärään kuvaan. Yleensä värjäytymisen kesto riippuu värjäysliuoksen tyypistä ja laadusta, mikrobien herkkyydestä värjäykseen ja tahrojen paksuuteen.

Muromtsevin väritys

Valmista kaksi ratkaisua:

Karboliinihappo (kiteinen)

Maalin liuottamisen jälkeen molemmat liuokset sekoitetaan ja suodatetaan paperisuodattimen läpi. Maali jatkuu pitkään. Tahrat maalataan suodatinpaperiliuskojen läpi 15-30 sekuntia.

Korjaavan tahrojen osalta kirjailija suosittelee alkoholin (80 osaa) ja formaliinin (20 osaa) valmistuksen 3-10 minuutin ajan.

Tämän värjäämisen mikrobeja sisältävissä soluissa havaitaan inkluusiot, bipolaarisuus, kapselit ja itiöt. Menetelmä sopii tahrojen värjäämiseen elimistä, verestä, viljelmistä mediaa luonnollisella proteiinilla ja puolittain nestemäisellä agarilla.

Näiden alustojen huumeiden tausta on vaaleanpunainen; kudosolut ja mikrobiset elimet on maalattu sinertävällä.

Vaikeat (differentiaaliset) tahrojen värjäysmenetelmät

Monimutkaiset värjäysmenetelmät perustuvat mikrobisolun fysikaalis-kemiallisen rakenteen ominaisuuksiin. Näiden menetelmien ydin on vaikutus kahden väriaineen värjäämiseen, joista toinen on tärkein maali, ja toinen - lisä (kontrasti). Kun ensimmäinen maali altistuu, tahra värjääntyy ja vasta sen jälkeen altistetaan lisävärille. Valkaisuaineina voidaan käyttää useita kemiallisia reagensseja (happoja, emäksiä, alkoholia, asetonia jne.). Pesun pesu tavallisella vedellä on myös puhtaasti mekaaninen valkaisuprosessi, mutta tämä vaatii paljon aikaa; Lisäksi värimuutokset ovat epätäydelliset. Valkaisuaineiden osalta mikrobit voidaan jakaa ryhmiin helposti ja vaikeasti valkaisuaineiksi. Kaikki mikrobit eivät ole yhtä tärkeitä valkaisuaineille; jotkut ovat happoja ja alkoholia kestäviä, toiset ovat vain haponkestäviä. Lopuksi jotkut esimerkiksi itiöt vastustavat voimakkaasti kaikkien valkaisuaineiden vaikutuksia ja kuuluvat maaleja kestävien aineiden ryhmään.

Monimutkaisilla värjäytymismenetelmillä on merkittävä differentiaalinen diagnostinen arvo tutkittavan mikrobin karakterisoimiseksi.

Gram-tahra

Kun käsiteltäessä murskeita (osiot) elimistä ja kudoksista, jotka sisältävät mikro-organismeja, gentianviolettia ja sitten jodia, mustavalmisteinen valmiste on valkaisun ominaisuus alkoholin vaikutuksen alaisena. Samanaikaisesti jotkin smeariin sisältyvät bakteerit myös värjääntyvät, kun taas toiset taas purppura. Lisävärjäyksellä (erityisesti Pfeifferin Fuchsinilla), alkoholilla värjäytyneet bakteerit ovat punaisia ​​(gram-negatiivisia). Toiset, jotka pitävät tiukasti violetin värin (jodi + gentian violettiyhdiste), jotka eivät ole valkaistuneita alkoholilla, kuuluvat grampositiivisten bakteerien ryhmään. Gram-positiivisten ja gram-negatiivisten bakteerien välinen ero riippuu niiden isoelektristen pisteiden erosta ja grampositiivisten bakteerien kyvyn säilyttää väri yhdistetään ribonukleiinihapon magnesiumsuolan läsnäoloon, jota gram-negatiiviset bakteerit eivät sisällä. Mikä parasta, Gram-tahra saadaan sen jälkeen, kun tahrat on kiinnitetty fysikaalisella menetelmällä (lämmitys). Tiettyjen bakteerityyppien asenteen erityispiirteitä eri maaleihin, erityisesti Gram-menetelmän värjäämiseen, on ominaista mikrobien ns. Tinktorialiset ominaisuudet.

Värjäystekniikka. Hiukan pienemmälle koekappaleelle ja liukuvaksi sijoitetaan hiukkasia, joka on kiinnitetty lämpöllä, ja siihen kaadetaan riittävä määrä kristalli-violetti-, karboli- tai aniliini-gentianvioletti- liuosta tai muuta violettiin trifenyylimetaanimaalia (esim. Metyyli- violetti) 1-2 minuuttia. Sitten maali poistetaan, suodatinpaperin kaistale poistetaan ja Lugol-liuos kaadetaan tahraan 1-2 minuutin ajan pesemättä vedellä. Liuos valutetaan ja dekoloroituu lääkeaineeksi 96 °: n alkoholissa 30-60 sekunnin ajan, pestään vedellä ja värjätään Pfeifferin Fuchsin-liuoksella (tai laimennetaan safraninilla, neutraalilla tai vesuvineellä) 2-3 minuuttia. Sitten maali pestään pois vedellä ja tahra kuivataan puhtaalla suodatinpaperilla.

Mikroskooppinen kuva: Jos Gram-tahrat ovat oikein värjäytyneet, grampositiiviset mikrobit värjäytyvät tummina purppurina ja gram-negatiiviset värit värjätään lisämaaliksi (esimerkiksi Pfeifferin vaaleanpunainen väri fuchsin fuchsin).

Älä käytä kontaminoitua suodatinpaperia: mikrobien mekaaninen siirto yhdestä tahrasta toiseen on mahdollista, mikä voi vaikuttaa mikroskopian tuloksiin. Maalille altistumisen, Lugol-liuoksen (mordant) ja alkoholin kesto riippuu smearin paksuudesta. Erityisen tärkeä kohta gramman värjäämisessä on värin värjäytyminen alkoholilla. Lyhyellä altistuksella alkoholiin saadaan maalaustyönä valmistettuja valmisteita, ja pitkäaikaisen altistumisen vuoksi kaikki mikrobit (myös p-positiiviset) heikentävät värin. Paksulle, paksulle tahraiselle (esimerkiksi agar-viljelmästä) alkoholialtistuksen aika olisi pidempi kuin ohut tahra, erityisesti nestemäisistä viljelmistä. Kun altistuvat alkoholille epätasaisesti valmistetulle pinnalle sen paksuissa osissa, mikrobit pysyivät värjäytymättöminä ja ohuina ne värjäyttäisivät; saat "motley" värikuvio, joka voi johtaa vääriin johtopäätöksiin.

Joskus gram-negatiivisia bakteereja voidaan havaita Gram-positiivisten bakteerien viljelmässä, mikä on sitä suurempi, sitä vanhempi väestö. Tämä ei ole muuta kuin bakteerien ruumiita, jotka ovat joutuneet solunsisäiseen autolyysiin, minkä seurauksena solu on menettänyt magnesium-ribonukleinaatit. Toisaalta enterobakteerien perheen nuorissa kulttuureissa (useita tunteja kasvu) näiden bakteerien gianttiset nuorisot muodot, jotka ovat 2-3 kertaa suurempia kuin aikuiset (18-tuntiset), ovat hyvin basofiilisiä, koska niiden sytoplasmaa on ylikuormitettu ribonukleinaateilla. Siksi, kun ne värjäytyvät grammalla, ne värjäytyvät magentalla niin voimakkaasti, että heikossa valossa ne voidaan ottaa gram-positiivisina kasvuvuuksina suikaleiksi.

Aloittelijoille sekä epäilyttävissä tapauksissa on suositeltavaa valmistaa kontrollivalmisteita samalle lasille, jossa koekappale sijaitsee - yksi mikrobien viljelmästä, ilmeisesti grampositiivisesta ja toisesta gram-negatiivisesta.

Kun lääkeaineen värimuutoksia grammanvärisessä alkoholissa voidaan kaataa suoraan tahraan, jatkuvasti ravistellen lasia. On parempi suorittaa värimuutokset kyvetteissä, joissa alkoholia kaadetaan, ja ottaen Cornetin pinsetit, lääke nostetaan ja lasketaan tarkkailemalla alkoholin väriä lasista. Hajoaminen katsotaan täydelliseksi, kun tahroista virtaavan alkoholipisarat muuttuvat väriltään kyvetissä olevan alkoholin kanssa; yleensä se kestää 10-30 sekuntia riippuen aivohalvauksen paksuudesta.

Alkoholi 96 °: ssa kyvetteissä tulee korvata useammin (80 °: n alkoholia ei erottele kunnolla). Käytetty alkoholi johdetaan yleensä kyvetteistä alkoholipolttimiin.

Aloittelijoille suositellaan jodoituneen alkoholin värjäytymistä. On todettu, että jos vähäinen jodin tinktuura lisätään värjäytyneeseen nesteeseen, niin mikrobit, jotka on värjätty gram-positiivisesti, eivät värjäytä tällaisessa nesteessä edes tunnin ajan, ja gram-negatiiviset värjätään noin 5 sekunnissa. Savateevin mukaan riittää, että lisätään 2-4 ml 10-prosenttista joditinktuuria 100 ml: aan 95 ° alkoholia; ratkaisu voi jatkua pitkään. Jos käytetään alkoholin sijasta asetonia, lisätään joditinuraattia ennen käyttöä.

Kaksi minuuttia riittää hajottamaan jodoitua alkoholia, minkä jälkeen pestään vedellä ja lisätään Pfeiffer-fuchsin-väriainetta.

Gram-värin menetelmän muuttaminen

Kuten yllä mainittiin, Gram-tahra on tärkein bakteerien tunnistusmenetelmä. Teoreettisesti on mahdollista jakaa bakteerit kahteen ryhmään: gram-positiiviset ja gram-negatiiviset; todellisuudessa on tapauksia, joissa samoja bakteereita kutsutaan "gram-valittaviksi". Koska menetelmä kehitti Christian Gram vuonna 1884, lukuisia Gram-värimuutoksia on julkaistu. Bakteereja, jotka värjätään lasilevyllä, saadaan suoralla menetelmällä viljelmästä nestemäisellä tai kiinteällä väliaineella, mutta on parasta valmistaa se formaliinipitoisesta, pestytäytteestä. Muutamia ylimääräisiä minuutteja, joita käytetään bakteerien suspendoimiseen 5% (tilavuus / tilavuus) formaliinissa, niiden kerääminen ja peseminen sentrifugoimalla, maksetaan, koska solujen koko ja muoto ovat hyvin säilyneet, solut värjätään tasaisesti ja satunnaisesti hajallaan olevat nesteet nestemäisestä viljelyalustasta puuttuvat. Joka tapauksessa on suositeltavaa kuivata lika ilmassa ja kiinnittää se kuumentamalla, kuten yksinkertaisen värjäyksen yhteydessä. On tärkeää standardisoida gramman tahrausmenetelmä. Samanlaiset tulokset antavat kaksi muuta värjäämismenetelmää - Hookerin muokkauksessa ja Burke-modifikaatiossa.

Gram-väritys Hookerin muokkauksessa.

Liuos A väriainevalmisteen valmistamiseksi:

Kristallivioletti (90% kuiva-ainepitoisuus)

Etanoli 95% (tilavuus / tilavuus)

Liuos B väriainevalmisteen valmistamiseksi:

Liuokset A ja B sekoitetaan, jolloin saadaan kristalliviolettiväriainevalmiste. Jätä 24 tunnin ajan ja ennen käyttöä suodatuspaperin läpi.

Jodi ja kaliumjodidi murskataan laastilla ja vettä lisätään hitaasti jatkuvalla jauhamalla, kunnes jodi liuotetaan. Säilytä tummassa pullossa.

Valkaisuun tarkoitettu liuotin:

Etanoli 95% (tilavuus / tilavuus)

Safranin O [2,5% (paino / tilavuus) 95% (tilavuus / tilavuus) etanolia]

Lämmössä kuivattu ilmakuivattu, bakteeripinta upotetaan 1 minuutin ajan kristalliviolettivärjäysliuoksessa.

Esipyyhe pestään heikossa, vinoon vesisuihkussa 2 sekunnin ajan.

Sekoite asetetaan jodi-mordanttiin 1 minuutiksi.

Se pestään heikossa, juoksevassa kulmassa vesijohtovedessä 2 sekunnin ajan, minkä jälkeen se kuivataan blottauspaperilla.

Upota seos 30 sekunnin ajan 95% etanolissa, ravistellen jälkimmäistä, jonka jälkeen tahra kuivataan blottauspaperilla.

Upota seos 10 sekunniksi lisäväriaineessa.

Esipyyhe pestään heikossa, kulmassa olevasta vesihöyrystä, kunnes väri on poistettu, minkä jälkeen se kuivataan blottauspaperilla.

Gram-tahra Burke-modifikaatiossa.

Kristallivioletti (90% kuiva-ainepitoisuus)

Mordant valmistettiin samalla tavoin kuin Hookerin muokkaukseen.

Liuotin värjäytymiseen: (varovaisuus, palava!)

Safranin O (85% kuiva-ainepitoisuus)

Kuiva-aine, joka on kuivattu ilmassa ja kiinnitetty kuumentamalla, upotetaan liuokseen A, lisätään 2-3 tippaa liuosta B ja inkuboidaan 2 minuutin ajan.

Pese lika jodin mordantilla ja peitä se sitten 2 minuuttia tuoreella mordantilla.

Pyykki pestään heikosta, kulmautuvasta vesivirrasta hanasta 2 sekuntia. Pinta ympäröivä pinta kuivataan blottauspaperilla, mutta itse tahra on suojattu kuivumiselta.

Dekolourisoiva liuotin lisätään pisaroittain kudottuun lasikuiluun, kunnes väri katoaa liuosta, joka virtaa lasista. Tämän jälkeen kuori kuivataan ilmassa.

Gram-menetelmä on tämä. Mikä on Gram-menetelmä?

Gram-menetelmä on mikro-organismien värjäysmenetelmä tutkimusta varten, joka mahdollistaa bakteerien erilaistumisen soluseinän biokemiallisten ominaisuuksien mukaan. Tanskan lääkäri G. K. Gram ehdotti vuonna 1884.

Gram-bakteereja, jotka on värjätty aniliiniväreillä - gentian tai metyylivioletti jne., Sitten väriaine on kiinnitetty jodiliuoksella. Värillisen huumeiden alkoholin seuraavassa pesemässä kutsutaan gram-positiivisia bakteereja (merkitty Gram (+)), toisin kuin Gram-negatiiviset bakteerit (Gram (-)), jotka värjääntyvät pestäessä.

Käytä diagnostiikassa

Gram-tahra on erittäin tärkeä bakteerien systematiikassa sekä tarttuvien tautien mikrobiologisessa diagnoosissa.

Gram-positiiviset kokit (lukuun ottamatta Neisseria-suvun edustajia) ja hajakuormittamattomat bakteerimuodot sekä hiivat, ne maalataan sinertävällä (tummansinisellä) värillä.

Monet nebulous bakteerit ovat gram-negatiivisia, ne muuttuvat punaisiksi, solutytöt muuttuvat kirkkaanpunaiseksi ja sytoplasma on vaaleanpunainen tai punertava.

Värjäystekniikka

Gram-värjäytyminen viittaa kompleksiseen värjäytymismenetelmään, kun kaksi väriainetta koskettaa tahraa, joista yksi on tärkein ja toinen lisätty. Väriaineiden lisäksi valkaisuaineita käytetään monimutkaisiin värjäysmenetelmiin: alkoholiin, happoihin jne.

Gram-värjäytymät käyttävät usein trifenyyli- metaaniryhmän aniliinivärejä: gentian, metyylivioletti tai kristallivioletti. Gram-positiiviset Gram-mikro-organismit antavat vahvan yhteyden näihin väriaineisiin ja jodiin. Samanaikaisesti ne eivät värjäyty alkoholia altistettaessa, minkä seurauksena mikro-organismit eivät muutu alun perin vahvistetulla violetilla värillä lisäämällä Fuchsin Gram (+) -värjäystä.

Gram-negatiiviset gram- (-) -mikro-organismit muodostavat yhdisteen emäksisiä väriaineita ja jodia, joka helposti tuhoutuu alkoholin vaikutuksesta. Tämän seurauksena mikrobit värjääntyvät ja värjätään sitten magentalla, jolloin ne saavat punaisen värin.

Materiaalien valmistelu maalaukseen

Koemateriaali levitetään ohuella kerroksella hyvin puretun dian pinnan yli. Valmistettu tahra kuivataan ilmassa ja kiinnitetään täydellisen kuivauksen jälkeen. Histologiset osiot valmistetaan rutiinimenetelmällä, joka kiinnittää kudoksen palaset formaliinissa ja kaadetaan parafiiniin.

fiksaatio

Kiinnittettäessä tahra kiinnittyy liukupinnan pinnalle, minkä vuoksi mikrobisoluja ei pestä pois valmisteen seuraavan värjäämisen aikana. Lisäksi kuolleet mikrobisolut värjävät paremmin kuin elävät solut.

Fysikaalista kiinnitysmenetelmää, joka perustuu korkean lämpötilan vaikutukseen mikrobisoluihin ja kemiallisiin menetelmiin, joissa käytetään kemikaaleja, jotka aiheuttavat sytoplasmisten proteiinien hyytymistä.

Fyysinen kiinnitysmenetelmä

Lasi-liukumäki valmistetaan pihditävällä tai oikealla kädellä olevilla I ja II sormilla harjalla ylöspäin ja sileällä liikkeellä ne suoritetaan 2-3 kertaa polttimen liekin yläosassa. Koko kiinnitysprosessi kestää enintään 2 s.

Kiinnityksen luotettavuus tarkistetaan seuraavalla menetelmällä: liukupinta on liimatta levytön vasemman puolen takapintaan. Jos tahra on kunnolla kiinni, lasin pitäisi olla kuuma, mutta ei aiheuta palovammoja (70-80 ° C).

Kiinteä kemiallinen menetelmä

Metyylialkoholi, asetoni, Nikiforovin seos (96% etyylialkoholin ja anesteettisen eetterin seos suhteessa 1: 1), Karnava-neste (etyylialkoholi 96% - 60%, kloroformi 30%, jääetikka 10%), -formaali (40% formaliinia 5 ml, etyylialkoholi 96 - 95 ml). Lasikuitu, jossa on kuivattu tahra, upotetaan pulloon kiinnitysainetta 10-15 minuuttia ja kuivataan sitten ilmassa. Käytetään myös pariina 40% formaliinia muutamassa sekunnissa.

Smear-värjäysprosessi

1. Kiinnitä kiinteä pinta, kaada yksi perusväreistä 2-3 minuuttia. Rainan välttämiseksi se värjätään suodatinpaperin läpi.
2. Tyhjennä maali ja poista suodatinpaperi varovasti. Likaa kaadetaan Lugol-liuoksella tai jodidiliuoksella Gram (kaliumjodidin ja kiteisen jodin vesiliuos 2: 1 -suhteessa) 1-2 minuuttia ennen kuin valmiste tulee mustaksi.
3. Liuos tyhjennetään, huuhtelu huuhdellaan 96 ° etyylialkoholilla tai asetonilla, kaadetaan ja tyhjennetään, kunnes smear-väriaine ja tyhjennysneste ovat kirkkaita (noin 20-40-60 sekuntia).
4. Pese lasi huolellisesti juoksevalla tai tislattua vettä 1-2 minuuttia.
5. Bakteerien gram-negatiivisen ryhmän tunnistamiseksi valmisteet värjätään lisäksi fuksiinilla tai safraniinilla (2-5 minuuttia).
6. Pestään juoksevassa vedessä ja kuivataan suodatinpaperilla.

Bakteerien tekniikka värjääminen histologisissa osissa Gram-Weigert

1. Vahat poistetut osat säädetään veteen.
2. Puhdista 20 minuuttia 1-prosenttisessa paraarosaniini- tai emäksisen fusiini-liuoksessa 1% etikkahapossa (väriaine liuos kuumennetaan kiehuvaksi, jäähdytetään ja suodatetaan).
3. Pestään 3 vuorossa tislattua vettä.
4. Maali 5 min 1% kristalliviolet tislatulla vedellä.
5. Huuhtele nopeasti 1% natriumkloridiliuoksessa.
6. Prosessoitu 30 sekunnin ajan seoksessa: 1 osa jodia + 2 osaa kaliumjodidia + 100 osaa tislattua vettä.
7. Valokuitu suodatinpaperilla.
8. Erota, levittämällä osaan yhtä suuria määriä aniliinia ja ksyleeniä (1 - 2 ml); liuokset tyhjennetään, kunnes väriainepilvet pysähtyvät liikkumasta pois siivilästä.
9. Suoritetaan 3 ksyleenin muutoksen jälkeen.
10. Suljettu balsamiin tai muuhun hartsiin, joka on liuotettu ksyleeniin.

Tulos: Gram-positiiviset bakteerit ovat sinimustat, violetti fibrin, ytimet ovat punaisia.

Katso myös

• Värjäys-mikro-organismit
• Aniliinivärit

viittaukset

Saksa

• Gram, HC (1884). "Über die isolate Färbung der Schizomyceten in Schnitt- und Trockenpräparaten". Fortschritte der Medizin 2: 185-89.

Englanniksi

Mikrobiologiset tutkimusmenetelmät

Mikrobiologisen tutkimuksen tarkoituksena on määrittää tiettyjen mikro-organismien etiologinen rooli taudin tai kliinisen oireyhtymän tapauksessa. Olisi pidettävä mielessä, että lisääntymisjärjestelmän elinten tulehduksellisten prosessien aiheuttamat aineet voivat olla UPM: n edustajia emättimen ja muiden biotooppien normaalin mikrofloorin ohimenevästä osasta ja absoluuttisista patogeeneistä - STI: n aiheuttavista tekijöistä. Tällainen yhteys STI: n ja opportunististen infektioiden välillä (DMP: n aiheuttama) määrittää mikrobiologisen diagnoosin integroidun lähestymistavan tarpeen.

KÄYTTÖAIHEET

Mikrobiologisia tutkimusmenetelmiä käytetään vahvistamaan tai sulkemaan pois tarttuvien tautien sairaudet.

MENETELMÄT

KLINIKÄISTEN MATERIAALIEN SÄÄNNÖT

Virtsaputken purkaus otetaan muovisella kertakäyttöisellä steriilillä bakteriologisella silmukalla, jonka tilavuus on 1 μl tai ohut diakronipyyhe alumiinilangalla. Virtsaputken esivahva avautuminen on puhdistettava sideharsolla tai puuvillalla. Koska näkyviä eritteitä ei ole, lääkäri voi suorittaa virtsaputken kevyen hieronnan. Tamponi / silmukka asetetaan virtsaputkeen 1-2 cm: n etäisyydelle ja poistetaan painamalla sivu- ja takaseinät kevyesti. Mikroskooppisiin ja immunofluoresenssitutkimuksiin materiaali siirretään lasilevyyn tamponin liikkuessa tai silmukan liikuttamiseksi kevyellä painemateriaalilla sen yli. Viljelmässä ja PCR: ssä materiaali sijoitetaan putkiin sopivilla kuljetusvälineillä.

Ulkopuoliset sukupuolielimet, emättimen aattona: steriilillä puuvilla (Dacron) tamponeilla otetut pinnat patologisesti muutetuista alueista; Hampun suurten hammaslääkkeiden tulehdusta varten suoritetaan lävistys, kun paise on avattu, rauhaset tarttuvat steriiliin puuvillakankaaseen.

Vagina: peilin ja hissiin työntämisen jälkeen purkaus otetaan steriilillä puuvillapuikolla takimmaisesta valssaimesta tai limakalvon patologisesti muutetuista osuuksista; viljelyä varten pyyhe pannaan steriiliin putkeen ja välittömästi lähetetään laboratoriolle. Jos tätä vaatimusta ei voida täyttää, otettu näyte sijoitetaan koeputkeen, jossa on kuljetusväline.

Mikroskopia varten otettu näyte siirretään lasilevyyn, joka tamponaa tamponi lasin kaikilla puolilla ja pyrkii jakamaan materiaali tasaisesti pitämällä biocenoosin kaikkien osien luontaiset väliinsä; liima kuivataan ilmassa, kiinnitetään 96-prosenttisella etanoliliuoksella (2-3 tippaa tahraa kohti täydelliseen haihdutukseen asti), leimattu lasi ja suljetussa säiliössä, joka lähetetään laboratoriolle. Trikomonaasikulttuurin diagnoosin aikana otettu purkaus sijoitetaan välittömästi ravintoalustalle ja kuljetetaan laboratoriolle.

Cervix: Kun kohdunkaula on altistettu peileille, kohdun emättimen osa käsitellään huolellisesti steriilillä 0,9-prosenttisella natriumkloridiliuoksella tai vedellä kostutetulla puuvillakankaalla, sitten vakiomuotoinen puuvillapusero työnnetään varovasti kohdunkaulan kanavaan, tyhjennetään, poistetaan tamponi koskematta emättimen seinämiin, ja laita se koeputkeen, jossa on viljelyväliainetta. Mikroskopian suorittamiseksi immunofluoresenssimenetelmällä erilaisissa modifikaatioissa, virologisessa tutkimuksessa tai PCR: ssä materiaali otetaan erityisellä harjalla, joka asetetaan kanavaan lika-pistokkeen poistamisen jälkeen tai näytteen ottamiseksi viljelmälle. Kun tamponiharja asetetaan kohdunkaulan kanavaan, sitä pyöritetään useita kertoja 1-2 cm: n päällä solukerran aikaansaamiseksi, mutta vältytään scarpingista ja verinäytteistä tamponilla. Otettu materiaali sijoitetaan koeputkiin sopivalla kuljetusvälineellä. Mikroskooppisten ja immunofluoresenssitutkimusten yhteydessä otettu näyte siirretään välittömästi pyyhkäisyltä lasilevyyn.

Uterus: kohtuun kohdistuvaa materiaalia voidaan saada vain käyttämällä erikoislaitetta, jossa on ulkovaippa ruiskuhöyryllä. Noudattaen asepsisin sääntöjä, siirtäkää kohdunkaulan kanava ja kohdussa avaa ruiskuun ulomman kalvon, sitten imettävä sisältö. Sitten sulje ulkovaippa ja poista koetin kohtuun.

Männynliitokset: tartunnan lähteestä saatava materiaali voidaan saada vain kirurgisella toimenpiteellä (pus, eksudata, biopsiamateriaali) tai lantion kasvainten kaltaisten muodostumien diagnostisen puhkaisemisen aikana emättimen holvien kautta (harkitse näytteen saastumismahdollisuutta emättimen mikroflooralla). Joissakin tapauksissa, jos kohdun sivuissa esiintyvien infektioiden paikka kommunikoi kohdun kanssa, toistuvat kohdunkaulan kaltaiset tutkimukset voivat olla hyödyllisiä, kun tutkimuksen tulokset ovat samantyyppisiä. Virtsa: Ulkopuolisen sukupuolielinten huolellisen huuhtelun jälkeen keskimääräinen aamunvapaan virtsaamisen osuus 5-10 ml: n määrästä kerätään steriiliin astiaan. Kun otetaan huomioon, että virtsaan sisältyvät mikro-organismit alkavat lisääntyä huoneenlämmössä, näyte on toimitettava laboratorioon 1-2 tunnin kuluessa väärien tulosten välttämiseksi, kun bakteriuriaa mitataan. Jos tätä vaatimusta ei voida täyttää, virtsanäytettä voidaan säilyttää 4 ° C: n lämpötilassa jääkaapissa enintään 12 tunniksi.

Veri: verikulttuuri (bakteerimääritys) on tarpeen, jos epäilet systeemisen tulehdusreaktion kehittymisen. Pysyvä hypertermia, vilunväristykset, hypothermia, leukosytoosi, moniorganisten toimintahäiriöiden merkkejä ovat kategoriset indikaatiot veren mikrobiologiselle tutkimukselle. Verinäytteet otetaan mahdollisimman varhaisessa vaiheessa 2-3 kertaa kuukautisten alkamisen jälkeen 30-60 minuutin etäisyydellä yläraajojen ääreisverisuuksista (verenvuoto kuumeen korkeudella ei lisää menetelmän herkkyyttä, optimaalinen veren määrä otetaan paremmin huomioon sairauden etiologian havaitsemiseksi). Optimaalinen käyttö tavallisille kaupallisille pulloille valmistetulla ravintoalustalla aerobisten mikro-organismien ja tiukka anaerobien viljelyyn. Erityistä huomiota asepsisääntöjen noudattamiseen: venytyspaikan ihoa käsitellään 1-2%: lla jodi- tai povidoniodiiniliuoksella, jossa on liikkeitä keskuksesta periferiaan vähintään 1 minuutin ajan. Desinfioinnin jälkeen venepunktioalueen tunnustelu ei ole hyväksyttävää. Välittömästi ennen laskimoon kohdistettua ihoa käsitellään 70-prosenttisella etanoliliuoksella. Manipulointi suoritetaan steriileissä käsineissä. Muovikorkit poistetaan pullosta, kumitulpat pyyhitään 70% etanoliliuoksella. Veren poistamisen jälkeen neula vaihtaa neulan ja lävistämällä kumitulppa, tuo veri injektiopulloon (noin 10 ml vettä on molemmissa injektiopulloissa). Alle 1-vuotiailla lapsilla 0,5-1,0 ml verta pullossa. 1 - 6-vuotiailla lapsilla veren kokonaismäärä on 1 ml kullekin elämänvuodolle, ja tämä määrä jakautuu kahden pullon väliin. 30-80 kg painavista lapsista ja aikuisista 10-20 ml verta jakautuu kahden injektiopullon väliin.

Yksi näyte perifeerisestä suonesta ja toinen katetrista on sallittua vain poikkeustapauksissa: tunnistetaan tarvittaessa katetriin liittyvä bakteeremia tai objektiiviset vaikeudet, jotka liittyvät venepunktioon.

KLIINISEN NÄYTTEEN MIKROSCOPINEN TUTKIMUS

Tärkeä vaihe mikrobiologisessa tutkimuksessa STI: n ja opportunististen infektioiden diagnosoinnissa. Mahdollistaa antaa alustavan arvion laadullinen ja määrällinen koostumus mikroflooran patologisen keskittyä, laadun arvioimiseksi pyydystäminen materiaalin (joka vastaa sen sivuston tulehduksen, kuten läsnäolo emättimen epiteelin pyyhkäisynäytteenä kohdunkaulan kanava, se rikkoo valintasääntöjen biotesteissä), sekä tunnistaa mikro-organismit eivät kasva tavallisiin ravintoaineisiin (gonokokit, trikomonadit, tarkasti anaerobiset bakteerit).

Valomikroskopian menetelmän herkkyys on mikro-organismien havaitsemisaste tasolla, joka on 4-5 g CFU / ml ja enemmän. Siksi joissakin tapauksissa etiologisesti merkittävät mikro-organismit voidaan havaita mikroskopialla. Tämä viittaa ensisijaisesti tiukasti anaerobisiin bakteereihin, joilla on tavallisesti alhaiset patogeeniset ominaisuudet, niiden etiologinen rooli ilmenee suurella kvantitatiivisella tasolla tartunnan lähdön kertymisen jälkeen. Ottaen huomioon erikoisuus monenlaisia ​​morfologia tiukka anaerobeja (bakteroidyprevotelly, fuzobakterii, Mobiluncus, veylonelly, leptotrihii) ja mikroaerofila gardnerelly, niiden havaitsemisesta Gram-värjättiin sivelyvalmisteet vastuuvapauden osoittaa niiden etiologinen rooli. Pohjimmiltaan tärkeä on emättimen sävyjen mikroskopio bakteerivaginoosin ja muiden vaginaalisten infektioiden diagnosoinnissa.

Kuitenkin valtaosalla vapaaehtoisista anaerobisista DIM-yhdisteistä ei ole morfologista omaperäisyyttä, ja niiden patogeenisyysasteen ja herkkyyden antibiooteille päinvastoin on äärimmäisen monipuolinen. Tämän vuoksi UPM: n kulttuuritieteellinen tutkimus vaatii tätä. Myös diagnoosi bakteeri vaginosis, mikroskooppinen menetelmän etuna on yli viljelmän tutkimus diagnosoimiseksi suhteellisen harvinaisia ​​lisääntymisikäisten todetaan emättimen microecology: sytolyyttinen vaginoosi, välimuotona microcenosis, vaginan epiteelissä atrofia (viimeinen ominaisuus vaihdevuodet ikä).

Diagnoosi vulvovaginal kandidiaasi voi usein suorittaa emättimen preparaatti vastuuvapauden havaitseminen värjätään leviää tai natiivien elementtien käyttö, sieni budding hiivasolut, fragmentteja Pseudomyseeliä kanssa blastosporien. Havaitseminen sienisolujen leviää osoittaa niiden suuria määriä (enemmän kuin 4-5 lg cfu / ml), ja useimmiten liittyy vaikeaa leukosyyttireaktiossa emättimen kokeena, ja kliiniset oireet tulehdus emättimessä, on riittävää vahvistaa kliininen diagnoosi emättimen kandidiaasin.

Gonorrhean laboratorio-diagnoosissa suoritetaan ensin virtsaputkesta ja kohdunkaulan kanavasta otettujen märkien mikroskooppi (jos ei ole viitteitä muiden lokusten tutkimiseen: nielu, sidekalvo, peräsuoli). Sinun tulisi yrittää tehdä rinnakkain 2 lyöntiä jokaisesta lokuksesta sinisen ja gramman värjäämiseksi. Akuutin tippuri tunnettu siitä, että puuttuminen tai niukasti edustajien määrä normaalin mikroflooran (laktobasillien), suuri määrä neutrofiilisten leukosyyttien ja läsnäolo gram-negatiivisten diplokokkeja sijoitettu leukosyytit (ilmiö keskeneräinen fagosytoosia) ja ilman leukosyyttejä. Kroonista gonorreaa on ominaista erilaisten mikroflorojen läsnä ohella gram-negatiivisilla diplocokilla leukosyyttien sisä- ja ulkopuolella sekä suuri määrä neutrofiilejä. Useimmiten gonorrean diagnoosi voidaan tehdä Gram-smearien mikroskopian perusteella. Kuitenkin raskaana olevat naiset, nuoret ja lapset varmasti kulttuurintutkimus kanssa lajinmääritys Neisseria gonorrhoeae erottaa muista kuin patogeenisia Neisseria, jotka tunnistavat komponenttien normaalia emätin mikrofloorasta tytöillä, ja kun kyseessä on ottaa materiaalia nielu tulisi olla tietoisia suuri määrä lajeja kuin patogeenisia Neisseria näissä tahroja millään ikä.

Mikroskooppinen menetelmä on tällä hetkellä pääasiallinen diagnoosin urogenitaalisessa trikomonaasissa. Suorita tutkimus natiivista lääkkeestä ja / tai värillisestä tahrauksesta. Natiivin lääkkeen mikroskopia, on tärkeää muistaa, että juuri materiaalia (irrotettava virtsaputki, emätin) on tutkittava - valmistuksessa ne paljastavat elävän, liikkuvan Trichomonas. Tämän valmiste valmistettiin menetelmällä "murskattu" pisaroita (tyhjennetään otettu lisäämällä lämmin, lähellä kehon lämpötilaa 0,9% natriumkloridiliuosta on peitetty suojalasi) tai "roikkuu" drop (suspensio otettu sakka pantiin hyvin lasilevylle) ja mikroskopiruyut suurennettaessa 400 kertaa, kun lauhdutin laskeutuu. Valmistetaan metyleenisinistä Gram- tai Romanovsky-Giemsa-värjäysvalmisteet tästä aineesta. Diagnoosi määritetään Trichomonas vaginalisin tyypillisten muotojen tunnistamisen perusteella.

Arvioidessaan emättimen likaisen mikroskopian tuloksia on kiinnitettävä huomiota seuraaviin seikkoihin:

• emättimen epiteelin tila: pinta-, väli- tai parabasaalikerroksen solut hallitsevat; läsnä niin kutsuttujen "ydin" solut - pinnan epiteelisolujen, tiheään kiinnittynyt ne gramvariabelnymi pieniä tikkuja, piilossa solun rajoja (kuvio 6-1.) tai "lozhnoklyuchevyh" solut - Lisääntynyt adheesio epiteelisoluihin gram-positiivisia sauvoja, yleensä laktobasillien ( Kuvio 6-2);
• leukosyyttireaktio: sen läsnäolo, vakavuus, fagosytoosin ilmentymät, sen loppuunsaattaminen;
• Mikroflora-koostumus: kvantitatiivinen ja laadullinen arviointi morphotyypeistä ja tinktorialisista ominaisuuksista.

Kuva 6-1. Vääriä avainkennoja (Gram-smear-mikroskooppi).

Kuva 6-2. Normotsenoosi (Gram-smearin mikroskooppi). Mikrobiologisen kontaminaation arviointi suoritetaan 4-pistejärjestelmällä (Nugent-kriteerit, jotka olemme jonkin verran muunnetut) - samassa näkökenttänä havaittujen mikrobiksen solujen määrä mikroskopian aikana upottamalla:

+ - enintään 10 mikrobisolua näkökentässä - vähimmäismäärä; ++ - 11 - 100 mikrobisolut katselualalla - kohtalainen luku; +++ - 100-1000 mikrobisolua näkökulmasta - suuri määrä;

++++ - yli 1000 mikrobisolua näkökulmasta - massiivinen määrä.

Emättimen mikrofloorin laadullinen arviointi sisältää kaikkien morfotyyppien erilaistumisen niiden tinktorialisten ominaisuuksien ja morfologisten ominaisuuksien mukaan. Erottaa morphotypes laktobasillien fuzobakterii, Bacteroides, Mobiluncus, leptotrihy, veylonell, gardnerellas, sekä gram-positiiviset kokit, koliformisten tikkuja hiivat. Trichomonas ja muut loiset löytyvät smearista.

Kun kuppa epäillään, irrotettavien eroosioiden ja haavojen pimeän kentän mikroskopia ja suoran immunofluoresenssin menetelmä käyttäen AT-diagnoosi-diagnoosia T. pallidumille eivät ole menettäneet diagnostista arvoaan. Näitä menetelmiä käytetään tapauksissa, joissa on kliinisiä ilmenemismuotoja ihon ja limakalvojen, joita epäillään syfilisistä. Lisäksi mikroskooppi-valmisteita voidaan valmistaa punctate alueellisista imusolmukkeista, aivo-selkäydinnesteestä, amyotuslääkkeestä. Erozivnoyazvennuyu pinta varovasti (jotta ei saada verenvuotoa) puhdistettiin käyttäen sideharso kostutetulla 0,9% natriumkloridi-liuosta, sitten varovasti avaamalla ja sulkemalla kaksi sormea ​​pohja haavaumat / eroosioita, stimuloimaan vakavien nestettä, joka ottaa bakteeri- silmukka tai kevyesti sovelletaan erosivipinta lasilevy. Tuloksena oleva seroosipurkaus sekoitetaan yhtä suurella määrällä 0,9% natriumkloridiliuosta, peitetään peitelaseilla ja natiivia valmistetta mikroskopataan patogeenin havaitsemiseksi useille ominaisuuksille ominaisista morfologisista merkkeistä ja liikkeen tyypistä. Tietyt kokemukset ovat tarpeen erottaakseen mikroskoopilla halkeava treponema urogeeniryhmän treponem-komennoista.

Tarkempi tavoite voi olla mikroskopia-valmisteiden diagnosointi suoralla immunofluoresenssilla. Näissä tapauksissa kuidut, jotka on otettu lasilevystä mistä tahansa kudosnesteestä, patologisten alueiden pinnat (mukaan lukien ruumiinavausmateriaali), kuivataan ilmassa, kiinnitetään etanolilla tai metanolilla. Tämän jälkeen valmisteeseen lisätään T. pallidumin spesifistä anti-treponemal-globuliinia. Aineen mikroskopista tutkimista havaitaan kirkkaan vihreän spesifisen fluoresenssin avulla.

Immunoluminoiva menetelmä - HG: n pää- ja laboratoriodiagnoosi tunnistetaan Ag-viruksen patologisen aineen valmistelussa. Yleensä käytetään suoran immunofluoresenssin menetelmää, mikä mahdollistaa sekä HSV: n että HSV1- ja HSV2-serotyyppien erit- täisen määrittämisen. Menetelmän herkkyys ja spesifisyys riippuvat käytettävien diagnostisten laitteiden laadusta. Tutkimuksen materiaali on tavallisesti neste avoimista vesikkeleistä, ihon ja limakalvojen eroosiivisten pintojen purkautuminen tai kaaren kohdunkaulan kanavan seinämien (latentti infektion muodossa). Materiaali otetaan bakteriologisella silmukalla tai erikoispyyhkeellä ja siirretään lasilevyyn.

Urogenitaalisessa klamydiassa Ar-klamydian toteaminen immunofluoresenssimikroskopian avulla on yksi johtavista laboratorio-diagnostisista menetelmistä. Yleensä käytetään suoran immunofluoresenssin, jonka aikana monoklonaalisia vasta - aineita levitetään eri Chlamydia - Agolipolysaccharide (ryhmä) -, Chlamydia - ulomman membraanin pääproteiinilajit ja vasta - aineet rekombinantti - Ag - klamidia vastaan. Diagnostiikan laatu määrittää menetelmän herkkyyden. Suuri merkitys arvioinnissa laadun suoralla immunofluoresenssilla ottamiseen materiaali on: preparaatti lasi otettu näyte kohdunkaula on oltava läsnä lieriömäinen epiteelisolujen ja poissa levyepiteelin soluja, erytrosyyttien ja leukosyyttien. Tulosta pidetään positiivisena, jos irrotettavalla mikroskoopilla, jossa on fluoresoiva mikroskooppi oranssinruskealla epiteelisolujen taustalla, löytyy vähintään 5 alkuelintä, joiden kasvu on 100 kertaa. Mahdollisten vääriä positiivisten tulosten vuoksi tätä menetelmää ei suositella nenänielun ja peräsuolen aiheuttamien materiaalien tutkimiseen.

KULTTUURITUTKIMUS

Menetelmä taudin taudinaiheuttajien puhtaiden viljelmien istuttamiseksi ja eristämiseksi toimii mikrobiologisen diagnostiikan "kultaisena standardina". Mikroskopian ohella kulttuuritutkimus on tärkein tapa diagnosoida gonorrea, trichomoniasis, klamydia. Molekyyli- ja biologiset tutkimusmenetelmät eivät vielä ole riittävän täsmällisiä näiden STI-taudinaiheuttajien havaitsemiseen klassisten menetelmien syrjäyttämiseksi, mutta epäilemättä tulevaisuus kuuluu niihin. Toinen tilanne, opportunisti-infektioiden sukuelinten, joiden määrä on aikakauden antibioottien ja kaupungistuminen yhteiskunnan kasvaa jatkuvasti ja dynaamisesti muuttaa niiden etiologinen rakennetta ja herkkyyttä antibiooteille. Näiden mikro-organismien usein esiintyvän antibioottiresistenssin vuoksi hoito epäonnistuu, joten nykyaikaisissa olosuhteissa rationaalisen etiotrooppisen hoidon riittävä valinta tunnistetaan jatkuvaksi kliiniseksi ongelmaksi.

On tunnettua, että sukupuolielinten tulehdusprosessien aiheuttamat aineet voivat olla monenlaisia ​​UPM: ää, jotka ovat normaalisti emättimen alkuperäisen (normaalin) mikrofloorin ja viereisten biotooppien transienttiosa. Niiden patogeeniset ominaisuudet ilmenevät vain tietyissä olosuhteissa, makro-organismin immuunihomeostaasin häiriöissä ja paikallisessa kolonisointiresistenssissä. Näissä olosuhteissa mikrobiologisessa diagnoosissa olisi otettava huomioon monien patogeenien mahdollinen etiologinen rooli, eikä vain mitään erityistä patogeenia, kuten absoluuttisten patogeenien aiheuttamien klassisten tartuntatautien diagnoosissa. Tutkimuksen tehtävänä on paitsi patologisen aineiston sisältämien mikro-organismien tunnistaminen myös niiden eetiologisen roolin syyt tämän potilaan tulehdusprosessiin. Näin ollen, kun kylvää kylmää kliinistä ainesta, erityisesti loikista, ja tavallisesti mikrofloora, on erittäin tärkeää käyttää monipuolisimpia ravintoalustoja, jotka soveltuvat monenlaisten mikro-organismien viljelyyn. Tässä tapauksessa on välttämätöntä ottaa huomioon erilaisten mikro-organismien kasvun määrälliset suhdeluvut primääriasemassa, koska todellinen syy-agentti kuuluu useimmiten osakkuusyritysten vallitsevaan rooliin. On kuitenkin olemassa lajeja, joilla on pieniä määriä patogeenisiä ominaisuuksia (ryhmien A ja B streptococci, proteus, Klebsiella, Staphylococcus aureus, Listeria jne.).

Emättimen opportunististen infektioiden mikrobiologinen diagnoosi perustuu mikroskooppisten ja kulttuuristen tutkimusten kokonaisarviointiin. Samanaikaisesti tarkasti anaerobinen mikrofluora -komponentti arvioidaan grammojen mikroskopilla - lukuisat anaerobiset morfotyypit, jotka on havaittu valomikroskopialla (niiden määrä irrotettavassa emättimessä ylittää 6 g CFU / ml) osoittaa niiden etiologisen roolin. Samanaikaisesti anaerobien herkkyyden määrittäminen antibiooteille ei tällä hetkellä ole kliinistä tarkoitusta, koska suurin osa niistä on erittäin herkkä antibiooteille, joilla on anaerobinen vaikutus (klindamysiini, metronidatsoli).

Päinvastoin, kun on kyse fakultatiivisista aerobisista ja aerobisista mikro-organismeista, emättimen purkamisen mikroskooppisen tutkimuksen diagnostinen arvo pienenee merkittävästi. Tämä johtuu ensinnäkin siitä, että patogeeninen mahdollinen näiden bakteerien voi tapahtua suhteellisen pieni (3-5 lg CFU / ml) määrä, jota ei havaita mikroskoopilla. Toiseksi, vaikka monimutkaisten anaerobisten bakteerien morfotyypit löytyvät grammoina, ne ovat morfologisesti samanlaisia ​​monissa bakteerien lajeissa ja sukuissa (nämä ovat koliformisia tikut tai grampositiiviset cocci). Samalla niiden patogeeniset ominaisuudet ja herkkyys antibiooteille voivat olla hyvin erilaisia. Siksi, että tunnusmerkkiosassa fakultativnoanaerobnoy microcenosis ja mikroaerofiilisissä (pääasiassa laktobasillien), joka voi olla samanlainen morfologia monia eri obligatnoanaerobnyh bakteerit (Clostridia, eubakteerit, propionihappobakteerien et ai.), On tarpeen Cultures - kylvöä valkovuoto. Näihin tarkoituksiin 5% veriagar (universaalisin väliaine useimpien IMOD) Sabouraud Agar (eristämiseksi sienet), MRS-elatusaineessa (viljelyä laktobasillien).

Viljelmätutkimuksen tulokset antavat mahdollisuuden arvioida lajien koostumusta ja eri lajien kvantitatiivista suhdetta mikro-organismien, mukaan lukien sienten ja myös laktobasillien, yhdistämisessä ja siten vahvistaa, että laktobakyylien suvun piiriin kuuluvat laktomorfotyypit kuuluvat grammatisiksi mikroskopoiksi. Eristäminen patologisen ja tunnistaminen eri lajien Enterobacteriaceae-heimoon, stafylokokit, streptokokit, nonfermenting bakteerit, Neisseria, coryneformiset bakteerit, sienet ja muut mikro-organismit jälkeen kvantifioida niiden kasvun asteen määrittämiseksi niiden etiologisen merkitys kehittämiseen vaginiitin tietylle potilaalle.

Lisäksi tapauksissa, joissa bakteerien vaginoosin diagnosointi tehdään gram-negatiivisen smekeman mikroskopialla, kylvämisen tulokset voivat paljastaa kohonneita UPM-tiittereitä (sieniä, enterokokkeja, koliformia ja muita bakteereja), jotka voivat aiheuttaa komplikaatioita etiotrooppisen hoidon jälkeen lääkkeillä, joilla on anaerobista vaikutusta. Erityisesti on pidettävä mielessä mikro-organismit, jotka jopa alhaisissa pitoisuuksissa ovat sikiön lisääntynyt riski (Listeria, Streptococcus-ryhmät A ja B).

Menetelmät nukleiinihappojen tunnistamiseksi

Menetelmiä DNA- ja RNA-taudinaiheuttajien havaitsemiseksi käytetään tällä hetkellä pääasiassa virusinfektioiden diagnoosiin. Geenidijärjestelmän menetelmät perustuvat nukleotidisekvenssien tunnistamiseen suoraan patologisessa materiaalissa molekyylikoettimien avulla - keinotekoisesti johdetut nukleiinihapot, jotka täydentävät viruksen nukleiinihappoja ja jotka on merkitty biotiinilla tai radioaktiivisella leimalla.

PCR-menetelmän ominaisuus on moninkertainen kopiointi (amplifikaatio, replikaatio) käyttäen DNA-polymeraasientsyymiä, joka on spesifinen DNA-fragmentti, joka koostuu useista kymmenistä tai satoista nukleotidipareista, joka on ainutlaatuinen, eli spesifinen tämän tyyppiselle viruspatogeenille. Replikaation mekanismi on sellainen, että fragmentin loppuunsaattaminen voi alkaa vain tietyissä aloituslohkoissa, joiden syntymistä DNA: n tietyillä alueilla käytetään alukkeita - erityisesti syntetisoituja oligonukleotideja -. Alukkeet täydentävät sekvenssejä tietyn fragmentin rajoissa ja DNA-synteesi etenee vain näiden rajojen sisällä.

PCR-menetelmä koostuu suuresta määrästä spesifisen DNA-fragmentin synteesin (amplifikaation) sykleistä, suuren kopiokertojen kerääntymisestä, joka voidaan sitten havaita tavanomaisilla detektointimenetelmillä (immunofluoresenssanalyysi, elektroforeesi).

● suorituskyvyn yksinkertaisuus ● mahdollisuuden täydelliseen automatisointiin ● tuloksen saavuttamisen nopeus ● pieni määrä tutkimukseen tarvittavia patologisia aineita ● mahdollisuus akuuttien, kroonisten ja latenttien infektioiden diagnosoimiseen;

● viljelemättömien, pysyvien patogeenien tunnistaminen.

PCR: n herkkyys on täydellinen diagnoosimenetelmäksi (useita suuruusluokkia korkeammat kuin muut testit). Menetelmän spesifisyys on myös suuri, mutta toistaiseksi suurin osa testijärjestelmistä ei ole riittävän luotettavia pakottamaan klassiset menetelmät jopa absoluuttisten patogeenien diagnosoimiseksi.

Mitä tulee opportunistisiin infektioihin, molekyyligeneettisten diagnoosimenetelmien merkitystä ei voida vielä tunnistaa mielekkääksi, koska tällaisten tulehdusprosessien kehittymisen ratkaiseva tekijä on kvantitatiivinen tekijä eikä mikro-organismin esiintyminen tutkittavalla paikalla.

Tällä hetkellä PCR-menetelmiä käytetään laajalti virus-, loiset- ja bakteeri-STI-taudin diagnosoinnissa, usein primaarisena seulonnana sekä parannuskeinona yhdessä muiden laboratoriodiagnoosimenetelmien kanssa. Uusimman tekniikan, kuten reaaliaikaisen PCR: n ja NASBA: n, avulla on mahdollista määrittää tarkka määrä HIV-potilailla.

SEROLOGISET DIAGNOSTISET MENETELMÄT

Menetelmät, joilla tunnistetaan erityiset AT- ja Ar-taudinaiheuttajat. Heidän roolinsa on tärkeä erityisesti silloin, kun taudinaiheuttajan eristäminen aiheuttaa merkittäviä vaikeuksia. Kun spesifistä AT: ta havainnoidaan, niiden tittereiden kasvu on välttämätöntä, jonka yhteydessä parittuja seerumeja tutkitaan 2-3 viikon välein. Immunoglobuliinien luokkien määrittely selkeästi kuvaa infektioprosessin vaiheita ja joissakin tapauksissa se voi toimia prognostisena merkkinä sen kurssille.

Erityisen tärkeitä ovat menetelmät Ag-taudinaiheuttajien havaitsemiseksi. Ne voidaan havaita jo infektioprosessin aikaisimmissa vaiheissa, mikä tekee mahdolliseksi nimenomaisen diagnoosin ja Ar: n kvantitatiivinen määritys taudin dynamiikassa toimii hoidon vaikuttavuuden kriteerinä.

Serologiset menetelmät ovat tulleet erittäin tärkeiksi syfilis- ja HIV-infektion diagnosoinnissa. HIV-infektion diagnosoinnissa käytetään yleensä entsyymi-sidottua immunosorbenttimääritystä, joka mahdollistaa tutkimuksen positiivisten tulosten saamisen jo 1-1,5 kuukauden kuluttua infektiosta. Positiiviset seulontamenetelmät, joissa käytetään entsyymi-immunomääritystä, vaativat vahvistamista immunoblot-menetelmällä, joka mahdollistaa vasta-aineiden todentamisen erilaisille virusproteiineille.

Kuppion diagnoosissa käytetään tällä hetkellä erilaisia ​​serologisia menetelmiä, jotka mahdollistavat vasta-aineiden havaitsemisen eri AH T. pallidum-determinantteihin elimistössä. Käytetystä Ag: sta riippuen serologiset reaktiot jaetaan kahteen ryhmään: treponemal ja non-treponemal. Ensimmäistä käytetään seulontaan. Ne ovat teknisesti yksinkertaisia, eivät vaadi paljon aikaa, määrällinen versio reaktiosta AT-titterin määrittämisellä on mahdollista, mikä mahdollistaa niiden käytön hoidon tehokkuuden arvioimiseksi. Nämä testit eivät kuitenkaan havaitse AT: tä primaarisen kuppauksen ensimmäisten 2-4 viikon aikana ja vääriä positiivisia ja vääriä negatiivisia reaktioita on mahdollista.

Treponemal-testeillä on suuri spesifisyys ja mahdollistaa ei-treponemisten testien tulokset. Mutta treponemal-testit olivat epäluotettavia aivo-selkäydinnesteessä (lukuun ottamatta suoran hemagglutinaation reaktiota), niitä ei myöskään käytetä hoidon tehokkuuden kontrollointiin, eikä vääriä positiivisia reaktioita voida sulkea pois.

Sellaisilla opportunistisilla bakteeri-infektioilla, joiden syy-taudinaiheuttajilla on monia tavallisia argensseja isännän argonin Ag: llä ja jotka toimivat heikoina stimulaattoreina spesifisten vasta-aineiden tuottamiseksi, serologisia diagnostisia menetelmiä käytännössä ei käytetä.

MIKROBIOLOGISEN TUTKIMUKSEN TULOSTEN TULKINTA

ELOKUVAT ELINTARVIKKEIDEN MIKROBIOLOGISEN TUTKIMUSTEN TULOKSEN ARVIOINTI

Arvioitaessa tulokset mikrobiologisten tutkimusten erotettiin naisten sukuelinten silpomista on pidettävä joukko ominaisuuksia kussakin tapauksessa: tiedot mikroskopia ensisijainen irtosolututkimus materiaali, tulokset kylvön kiinteällä ravintoalustalla (kvantitatiivinen arvio kasvun erilaisia), sekä kliinisiä sairauden oireita ja historian potilaalle. Siten, tutkimuksessa materiaalin suljettujen onteloiden (pistemäisiä kasvain muodostumat lantion, lapsivesi) sekä elimet, normaalisti steriilistä (kohtu pitoisuus kaapimalla endometriumin kappaletta elinten ja kudosten poistaa leikkauksen aikana), mikro-organismien kasvun, erityisesti monokulttuurissa todisteita niiden etiologisesta roolista. Kun tutkitaan materiaalia lohista, ja niillä on tavallisesti useita erilaisia ​​mikroflooria, kiinnitetään erityistä huomiota lajikokoonpanon arviointiin, eri lajien kasvun kvantitatiiviseen määrittämiseen primäärisementin aikana, tulosten yhdenmukaisuudella toistetuilla tutkimuksilla sekä kliinisiin tietoihin. Mikroskopian ja emättimen vastuuvapauden viljelyn kokonaisarvioinnin perusteella voidaan ehdottaa seuraavia mikrobiologisia arviointiperusteita vaginaalisen mikroseoksian tilalle yksittäisten nosologisten muotojen osalta lisääntymisikäisten naisilla.

NORMOTSENOZ

• Mikroskooppinen preparaatti, Gram värjättiin (kuvio 6-3).: ♦ vaginan epiteelin sisältää solujen pintakerrosten, välikerros on harvinaisempaa soluja (suhde voi vaihdella riippuen vaiheiden kuukautiskierron, raskauden, monet keskikokoisia soluja), "avain" soluja, joilta puuttuu, joskus esiintyy "vääriä avaimia" soluja ♦ leukosyyttireaktio puuttuu tai heikosti ilmaistaan ​​- eristetyt leukosyytit näkökentässä ♦ mikro-organismien kokonaismäärä on kohtuullinen tai suuri, ♦ hallitseva morfotyyppi on laktobasilli, muut rotyypit puuttuvat tai niiden määrä lasketaan

yksittäisiä mikrobisoluja harvinaisissa näkökohdissa.