logo

E. coli gramma tahra

Mikro-organismit (lat. Micros - small) - organismit, jotka ovat näkymättömiä paljaalle silmälle. Näitä ovat protozoa, spirokeeet, sienet, bakteerit, virukset, joiden tutkiminen on mukana mikrobiologiassa. Mikro-organismien koko mitataan mikrometreissä (μm). Mikro-maailmassa on monenlaisia ​​muotoja, jotka jaetaan ryhmiin biologisten luokituksen yleisten periaatteiden mukaisesti.

Ensimmäinen yleinen biologinen luokitus luotiin XVIII vuosisadalla ruotsalaisen tiedemies C. Linnaeuksen järjestelmä, joka perustuu morfologisiin merkkeihin ja eläinten ja kasvien maailmaan. Kun tieteen kehittyminen luokituksessa alkoi ottaa huomioon mikro-organismien morfologiset, mutta myös fysiologiset, biokemialliset ja geneettiset piirteet. Tällä hetkellä on mahdotonta puhua kaikkien elävien organismien yhtenäisestä luokituksesta: samalla kun säilytetään yhtenäiset periaatteet, makro- ja mikro-organismin luokituksilla on omat ominaispiirteensä.

Kaikkien luokitusten tärkeimmät vaiheet ovat: valtakunta - jako - luokka (ryhmä) - järjestys - perhe - sukupuoli - lajit. Tärkein luokitusluokka on lajike - joukko yhteistä alkuperää olevia organismeja, samanlaisia ​​morfologisia ja fysiologisia merkkejä ja aineenvaihduntaa.

Mikro-organismit kuuluvat prokaryoottien valtakuntaan, jonka edustajat, toisin kuin eukaryootteilla, eivät ole sisustettu ydin. Perintöainetiedot prokaryooteissa suljetaan solun sytoplasmaan sijoittuvaan DNA-molekyyliin.

Mikro-organismeille hyväksyttiin vuonna 1980 yhtenäinen kansainvälinen luokitus, joka perustuu amerikkalaisen tutkijan Bergiin esittämään järjestelmään.

Sen määrittämiseksi, mitkä lajit mikro-organismi kuuluu, on tarpeen tutkia sen ominaisuuksia (solumuoto, sukulaisuus, motiliteetti, entsymaattiset ominaisuudet) käyttäen erilaisia ​​menetelmiä ja määrittämällä sen järjestelmällinen asema - tunnistaa.

Lajiin on olemassa vaihtoehtoja: morfovaarit eroavat morfologiassa, bioavariantit - biologisissa ominaisuuksissa, kemovariantit - entsymaattisessa aktiivisuudessa, serovariantit - antigeenisessä rakenteessa, faagivariantteja - herkissä faageissa.

Mikro-organismien nimeämistä varten hyväksyttiin C. Linneyn käyttöön ottama yleinen biologinen biologinen tai binomialinen kaksoisnimikkeistö. Etunimi määrittelee lajitelman ja on kirjoitettu isolla kirjaimella. Toinen nimi osoittaa tyypin ja se on kirjoitettu pienellä kirjaimella. Esimerkiksi Staphylococcus aureus - Staphylococcus aureus. Nimet voivat heijastaa mikro-organismeja havaitsevien tutkijoiden nimiä: brucella - Bruce, Escherichia - Escherichin kunniaksi jne. Mikro-organismiin vaikuttavien elinten nimet sisältyvät pneumokokkeihin - keuhkoihin, meningokokkiin - aivokalvoon jne..

bakteerit

Bakteerit ovat yksisoluisia organismeja, joissa ei ole klorofylliä. Bakteerisolun keskimääräinen koko on 2-6 mikronia. Tietyn tyyppisiin mikro-organismeihin sisältyvien bakteerisolujen koko ja muoto voivat vaihdella erilaisten tekijöiden vaikutuksesta (bakteerikulttuurin, elinympäristön jne. Iästä riippuen). Tätä ilmiötä kutsutaan polymorfismiksi.

Solun muodon mukaan bakteerit jaetaan kolmeen ryhmään: pallomaiset, sauvanmuotoiset ja vääntyneet (kuvio 4).

Pallomaisia ​​bakteereita kutsutaan cocci (Latinalaisesta, Coccus - marjasta) ja niiden solujen halkaisija on 0,5-1 mikronia. Cocci-muoto on monipuolinen: pyöreä, lanceolate, bean-muotoinen. Solujen keskinäisen järjestelyn mukaan jakautuminen on erotettu cocci: micrococci (lat. Micros - small) - solut jakautuvat eri tasoille ja sijaitsevat erikseen; diplococci (latinalaisesta diploosista - kaksinkertainen) - solut jaetaan yhteen tasoon ja järjestetään sitten pareittain; Näihin kuuluvat lanceolaariset pneumokokit ja papu-gonokokit ja meningokokit; Streptococci (lat. Streptos - ketjusta) - solut jakautuvat yhteen tasoon eivätkä poikkea muodostaen ketjun; Staphylococcus (latinasta Staphile - nippu) - solut jaetaan eri tasoihin, muodostaen klustereita rypäleiden muodossa; tetracocci (lat. tetra - neljä) - solut on jaettu kahteen keskinäisesti kohtisuoraan tasoon ja järjestetty neljään; Sarcins (lat. Sarcio - connect) - solut jaetaan kolmeen keskinäisesti kohtisuoraan tasoon ja järjestetään paaleina tai 8 tai 16 solujen kussakin paketissa.

Cocci jakautuu laajalti ulkoiseen ympäristöön sekä ihmisiin ja eläimiin. Lähes kaikki karkearyhmät, lukuun ottamatta mikrokokoja, tetrakokkeja ja sarkoneita, ovat tartuntatauteja aiheuttavia tekijöitä.

Rod-muotoisia muotoja kutsutaan bakteereiksi. Niiden keskikoko on pituudeltaan 1 - 6 mikronia ja paksuudeltaan 0,5 - 2 mikronia.

Bakteerit eroavat ulkonäöltään: niiden päitä voidaan pyöristää (E. coli), silputtu (pernarutto patogeeni), terävä (syövän aiheuttaja) tai paksuuntunut (difteria-patogeeni). Jakamisen jälkeen bakteerit voidaan järjestää pareittain - diplobacter (Klebsiella), ketju (pernarutto patogeeni), joskus kulmassa toisiinsa tai ristikkäin (difteria-patogeeni). Useimmat bakteerit asettuvat satunnaisesti.

Bakteereista on kaarevia muotoja - vibriot (koleran aiheuttaja).

Spiraalit ja spiroketit kuuluvat kavennettuihin muotoihin. Solujensa muoto muistuttaa spiraalia. Useimmat spiraali neboleznetvorny.

Bakteerisolun rakenne

Yhdessä valomikroskoopin kanssa käytetään elektronimikroskooppisia ja mikrokemiallisia tutkimuksia bakteerisolun rakenteen tutkimiseen bakteerisolun ultrastruktuurin määrittämiseksi.

Bakteerisolu (kuvio 5) koostuu seuraavista osista: kolmi- kerroksinen kalvo, sytoplasmia erilaisilla sulkeumilla ja ydinaines (ydin). Muita rakenteellisia muodostelmia ovat kapselit, itiöt, flagella, joivat.

Soluseinä koostuu ulkoisesta limakalvokerroksesta, soluseinämästä ja sytoplasmakalvosta.

Limakapselikasetti sijaitsee solun ulkopuolella ja suorittaa suojatoiminnon.

Soluseinä on yksi solun tärkeimmistä rakenteellisista elementeistä, säilyttäen sen muodon ja erottamalla solun ympäristöstä. Soluseinämän tärkeä ominaisuus on selektiivinen läpäisevyys, joka varmistaa penetraation välttämättömien ravintoaineiden (aminohapot, hiilihydraatit jne.) Soluun ja metabolisen tuotteen erittymisen solusta. Soluseinä pitää vakion osmoottisen paineen solussa. Seinämän vahvuus tarjoaa mureinia, joka on polysakkaridin luonteinen aine. Jotkut aineet tuhoavat soluseinää, kuten lysotsyymiä.

Bakteereja, jotka ovat kokonaan puuttuneet soluseinästä, kutsutaan protoplasteiksi. Heillä on kyky hengittää, jakaa ja syntetisoida entsyymejä; ulkoisiin tekijöihin: mekaanisiin vaurioihin, osmoottiseen paineeseen, ilmastukseen jne. Protoplastit voidaan tallentaa vain hypertonisiin ratkaisuihin.

Osittain tuhoutuneiden soluseinämän bakteereita kutsutaan sferoplasteiksi. Jos estät soluseinämän synteesin prosessin käyttämällä penisilliiniä, muodostuu L-muotoja, jotka kaikissa bakteerilajissa ovat pallomaisia ​​suuria ja pieniä soluja vacuolien kanssa.

Sytoplasminen kalvo sopii tiukasti soluseinään sisältä. Se on hyvin ohut (8-10 nm) ja se koostuu proteiineista ja fosfolipideistä. Se on raja puoliläpäisevä kerros, jonka läpi solu on kytketty. Kalvo sisältää permeaasientsyymejä, jotka suorittavat aktiivisen aineen siirron ja hengitysentsyymit. Sytoplasmakalvo muodostaa soluosioon osallistuvat mesosomit. Kun solu sijoitetaan hypertoniseen liuokseen, kalvo voi erota soluseinämästä.

Sytoplasma - bakteerisolun sisäinen sisältö. Se on kolloidinen järjestelmä, joka koostuu vedestä, proteiineista, hiilihydraateista, lipideistä, erilaisista mineraalisuoloista. Sytoplasman kemiallinen koostumus ja sakeus vaihtelevat solun iän ja ympäristön olosuhteiden mukaan. Sytoplasma sisältää ydinmateriaalia, ribosomeja ja erilaisia ​​sulkeumia.

Nukleoidi, solun ydinmateriaali, sen perinnöllinen laite. Prokaryoottien ydinaines, toisin kuin eukaryootteilla, ei ole omaa kalvoaan. Kypsän solun nukleoidi on DNA: n kaksoisjuoste, joka on kierretty renkaaseen. Solun geenitieto koodataan DNA-molekyylissä. Geenitekniikan mukaan ydinainetta kutsutaan geeniksi tai genomiksi.

Ribosomit sijaitsevat solun sytoplasmassa ja suorittavat proteiinisynteesin funktion. Ribosomin koostumus sisältää 60% RNA: ta ja 40% proteiinia. Solujen ribosomien määrä saavuttaa 10 000. Yhdistettäessä ribosomit muodostavat polysomeja.

Sisältö - rakeet, jotka sisältävät erilaisia ​​ravintoaineita: tärkkelys, glykogeeni, rasva, volutin. Ne sijaitsevat sytoplasmassa.

Bakteerien solut elintärkeän toiminnan prosessissa muodostavat suojaavia organeleja - kapseleita ja itiöitä.

Kapseli on ulompi tiivistetty limakalvokerros soluseinän vieressä. Tämä on suojaava elin, joka esiintyy joissakin bakteereissa, kun ne tulevat ihmisten ja eläinten ruumiiseen. Kapseli suojaa mikro-organismia kehon suojaavilta tekijöiltä (keuhkokuumeen ja pernaruton taudinaiheuttajat). Joillakin mikro-organismeilla on pysyvä kapseli (Klebsiella).

Itiöitä löytyy vain sauvanmuotoisista bakteereista. Ne muodostuvat, kun mikro-organismi joutuu epäsuotuisiin ympäristöolosuhteisiin (korkeat lämpötilat, kuivaus, pH: n muuttaminen, ravinteiden määrän vähentäminen ympäristössä jne.). Itiöt sijaitsevat bakteerisolun sisällä ja edustavat sytoplasman tiivistettyä aluetta nukleoidilla, joka on pukeutunut omaan tiheään kalvoonsa. Kemiallisessa koostumuksessa ne poikkeavat kasvullisista soluista pienessä määrin vettä, lisätään lipidien ja kalsiumsuolojen pitoisuutta, mikä edistää itiöiden korkeaa stabiiliutta. Kiertäminen tapahtuu 18-20 tunnin kuluessa; kun mikro-organismi tulee spore-suotuisiin olosuhteisiin 4-5 tunnin kuluessa, se itää kasvulliseksi. Bakteerisolussa muodostuu vain yksi spori, joten itiöt eivät ole lisääntymiselimiä, vaan ne kestävät haitallisia olosuhteita.

Sporeformoituvia aerobisia bakteereita kutsutaan bacilliksi, ja anaerobisia bakteereja kutsutaan klostridiksi.

Sporeet eroavat muodon, koon ja sijainnin solussa. Ne voidaan sijoittaa keskitetysti, subterminaalisesti ja lopullisesti (Kuva 6). Pernarutto-taudinaiheuttaja sijaitsee keskellä, sen koko ei ylitä solun halkaisijaa. Botulismin taudinaiheuttajan spora sijaitsee lähempänä solun loppua - subterminali ja ylittää solun leveyden. Tetanus-taudinaiheuttajan tapauksessa solun päässä on pyöristetty itiö - päätepiste ja huomattavasti suurempi solun leveys.

Flagella ovat liikkumiselimiä, jotka ovat tyypillisiä sauvanmuotoisille bakteereille. Nämä ovat ohut filamentti fibrilejä, jotka koostuvat proteiinista, flagelliinista. Niiden pituus ylittää merkittävästi bakteerisolun pituuden. Flagella lähtee sytoplasmassa sijaitsevasta perusrungosta ja siirtyy solun pinnalle. Niiden läsnäoloa voidaan havaita määrittämällä solujen liikkuvuus mikroskoopilla, osittain nestemäisessä ravintoalustassa tai värjäämällä erityisillä menetelmillä. Symbolin ultrastruktuuria tutkitaan elektronimikroskoopissa. Flagellan sijaintipaikan mukaan bakteerit jaetaan ryhmiin (ks. Kuvio 6): monotrichs yhdellä flagella (kolera aiheuttava aine); amphitrikhs - solmuina tai single flagellina solun molemmissa päissä (spirilla); lofotrichi - lippulaivalla solun toisessa päässä (ulosteinen alkaliä muodostava aine); peritrichas - flagella, joka sijaitsee koko solun pinnalla (suoliston bakteerit). Bakteerien liikkumisnopeus riippuu flagellan määrästä ja sijainnista (monotrichs ovat aktiivisimpia), bakteerien iän ja ympäristötekijöiden vaikutuksesta.

Juoneet tai fimbriae - villit, jotka sijaitsevat bakteerisolujen pinnalla. Ne ovat lyhyempiä ja ohuempia kuin liuskalla ja niissä on myös kierrerakenne. Koostuu juomaproteiinista - pilli. Jotkut joivat (muutama sata) liittävät bakteereja eläimille ja ihmisille, kun taas toiset (yksittäiset) sisältävät geneettisen materiaalin siirtämisen solusta soluun.

mykoplasmaa

Mykoplasmat ovat soluja, joilla ei ole soluseinää, mutta niitä ympäröi kolmikerroksinen lipoproteiinisytoplasmakalvo. Mykoplasmat voivat olla pallomaisia, soikeita, filamenttien ja tähtien muodossa. Mykoplasmat Bergsin luokituksen mukaan jaetaan erilliseen ryhmään. Tällä hetkellä nämä mikro-organismit saavat yhä enemmän huomiota tulehduksellisen luonteen patogeeneina. Niiden koko vaihtelee muutamasta mikrometristä 125-150 nm: iin. Pienet mykoplasmat kulkevat bakteerisuodattimien läpi ja niitä kutsutaan suodatusmuodoiksi.

spirokeettaa

Spirokeeet (ks. Kuvio 52) (latinalaisesta speira - taivutuksesta, chaite - hiukset) - ohut, mutkikas, liikkuvista yksisoluisista organismeista, joiden koko vaihtelee 5 - 500 mikronia ja leveys 0,3-0,75 mikronia. Protoooa käyttäen niillä on yhteinen liikerata vähentämällä sisäistä aksiaalista filamenttia, joka koostuu fibrillien nippusta. Spirokeettin liikkeen luonne on erilainen: translaatio, kierto, flexio, aaltoileva. Loput solurakenteesta ovat tyypillisiä bakteereille. Jotkut spirokeeet ovat hieman värjätty aniliiniväreillä. Spiroheesit on jaettu synnytykseen langan kiharojen määrän ja muodon ja sen päätyjen mukaan. Niiden saprofyyttisten muotojen lisäksi, jotka ovat luonteeltaan yleisiä ja ihmiskehossa, spirokeasta on taudinaiheuttajia, syfilisin ja muiden sairauksien aiheuttajia.

riketsiat

Rickettsia - mikro-organismit kooltaan 0,2 - 30 mikronia. Heillä on tavallinen bakteerien solurakenne: kaksikerroksinen, sytoplasma, nukleoidi. Rickettsian muoto voi olla sauvan muotoinen, filiforminen ja coccoid. Kaikki rickettsia ovat solunsisäisiä loisia, eli ne voivat kehittyä vain elävien organismien soluissa. Ne aiheuttavat tarttuvia tauteja, kuten typhusia ja erilaisia ​​herjauksia. Rickettsiae-kantajat ovat niveljalkaisia: punkit, täplät ja kirput, joiden rykälät ovat lisääntyneet.

virukset

Virukset (katso kuva 53) ovat pienimpiä ei-soluisia organismeja. Viruspartikkelia kutsutaan virioniksi. Virion mitat vaihtelevat välillä 15 - 400 nm. Useimmat virukset näkyvät vain elektronimikroskoopilla. Virionin kuori, kapsidi, koostuu proteiinimolekyyleistä. Sisällä on yksi ainoa tyyppinen nukleiinihappo - DNA tai RNA. Nukleiinihappovirusten tyypit jaetaan kahteen ryhmään - DNA- ja RNA-viruksiin. Kaikki virukset ovat pakollisia (pakollisia) loisia ja laboratorioita viljellään kanan alkioissa, eläimissä tai kudosviljelyssä. Virionien muoto on monipuolinen: pallomainen, sauvan muotoinen, kuutiomainen ja siittiö. Virusten lisääntyminen tapahtuu isäntäsolun kuoren ja nukleiinihapon erillisellä synteesillä, jota seuraa virionien kokoaminen. Tätä prosessia kutsutaan kopioimiseksi. Isäntäorganismissa jotkut virukset muodostavat solunsisäiset sulkeumat ja alkuelimet, jotka näkyvät tavanomaisessa valomikroskoopissa, koska niiden arvot ovat useita mikrometrejä. Näillä muodostelmilla on diagnostinen arvo. Virukset aiheuttavat bakteerien, kasvien, eläinten sairauksia. Tärkeimmät viruksen luonteiset ihmisen tartuntataudit ovat influenssa, tuhkarokko, polio, hepatiitti ja raivotauti.

Virusten joukosta eristetään faagiryhmä (Lat. Phagos - devouring), mikä aiheuttaa mikrobisten solujen hajotuksen (hävittämisen). Virusten luontaisten ominaisuuksien ja koostumuksen säilyttäessä faagit eroavat virion rakenteessa (ks. Luku 8). Ne eivät aiheuta ihmisten ja eläinten sairauksia.

Testaa kysymyksiä

1. Kerro minulle mikro-organismien luokittelusta.

2. Mitkä ovat prokaryoottien valtakunnan edustajien tärkeimmät ominaisuudet?

3. Luettelo ja kuvaus bakteerien tärkeimmistä muodoista.

4. Nimeä solun tärkeimmät organelit ja niiden tarkoitus.

5. Anna lyhyt kuvaus bakteerien ja virusten pääryhmistä.

Tutkimus mikro-organismien morfologiasta

Mikro-organismien morfologian tutkimiseksi käytettiin mikroskooppista tutkimusmenetelmää. Tärkeä edellytys tämän menetelmän menestykselliselle käytölle on asianmukainen valmistaminen tahra-aineesta tutkimuksen kohteena olevasta materiaalista tai bakteerikulttuurista. Kulttuuri viittaa mikro-organismeihin, joita kasvatetaan ravintoalustalla laboratoriossa.

Vaipanvalmistuksen tekniikka

Työssä on oltava puhdas ja rasvanpoisto liuku- ja suojalaseista. Uudet lasit kiehuvat 15-20 minuutin ajan 2-5%: n soodiliuoksessa tai saippuavedessä, huuhdotaan vedellä ja laitetaan heikkoun suolahappoon, huuhdotaan sitten perusteellisesti vedellä.

Väriaineita tai upotusöljyä käyttäviä ja saastuneita lasit voidaan käsitellä kahdella tavalla: 1) upotettava 2 tuntia väkevässä rikkihapossa tai kromisessa seoksessa ja huuhtele huolellisesti; 2) keitetään 30-40 minuutin ajan 5%: n liuoksessa soodaa tai emästä. Raaka lasi voidaan poistaa rasvaamalla sitä saippualla ja puhdistaa se sitten kuivalla kankaalla.

Varoitus! Jos lasi on hyvin rasvattomaksi, niin vesipisara leviää tasaisesti, eikä se hajoa pieniin pisaroihin.

Lasi varastoidaan aluksiin, joissa on maaperäkorkit Nikiforovin (yhtä suuret määrät alkoholia ja eetteriä) tai 96-prosenttisen alkoholin seoksessa. Lasiliuoksista poistetaan pinseteillä.

Varoitus! Työskentelyn aikana lasia pidetään sormilla reunaan.

Tutkimuksen materiaali levitetään lasilevyyn bakteerilenkillä, neulalla tai Pasteur-pipetillä. Yleisimmin käytetty bakteerisilmukka (kuvio 7), joka on tehty 5-6 cm: n platina- tai nikkelifilamentista, silmukka on kiinnitetty lankarulla tai sinetöity lasisauvaan. Lanka on taivutettu renkaaksi, jonka koko on 1 × 1,5 tai 2 × 3 μm.

Varoitus! Oikein valmistettu silmukka vedessä upotettuna ja siitä erotettuna säilyttää vesikalvon.

Ennen kuin murskaus tehdään, silmukan työosa poltetaan polttimen liekissä pystysuorassa asennossa: ensin silmukka ja sitten metallitanko. Tämä manipulointi suoritetaan kylvön loppumisen jälkeen.

Nesteen ravintoalustalle kasvatetun viljelyn kasvatuksen valmistaminen. Kuorimaton lasilasi poltetaan polttimessa ja jäähdytetään. Kulttaa levitetään jalustalle asetetulle lasilevylle (Petri-astia, jalusta). Viljelmäputki pidetään vasemman käden peukalolla ja etusormella. Silmukka pidetään oikeassa kädessä. Ilman irti silmukkaa oikean käden sormi painaa korkkia käden kämmenelle ja poista se varovasti putkesta. Liikkeen on oltava sileä ja rauhallinen. Kurkun putket poltettiin polttimen liekissä. Injektoidaan silmukka putkeen. Jäähdytä silmukka putken seinää vasten ja upota se sitten viljelmään. Ota silmukka pois koskematta putken seinämiin. Sulje tulppa ennen sen kulkua polttimen liekin läpi. Aseta putki jalustalle. Silmukka viedään viljelmään lasilevyllä levittämällä sitä tasaisesti pyöreään liikkeeseen. Sitten silmukka poltetaan polttimen liekissä. Kuori jää kuivumaan.

Varoitus! Kuori on tasaisesti jauhettava, ohut ja pieni (kahden kopeakaalin kanssa).

Värien valmistaminen tiheästä ravintoalustasta kasvatetusta viljelmästä. Valmistetulla lasilevyllä käytetään pisaraa isotonista natriumkloridiliuosta (0,9%) Pasteur-pipetillä tai silmukalla. Viljelmä viedään huolellisesti pois agarista koeputkessa tai Petri-maljalla ja emulgoidaan lasin pudotukseen. Valmisteen tahran tulee olla yhtenäinen eikä paksu. Kun se kuivuu lasilevyyn, se on heikko.

Maku- tai yvelinesteen valmistaminen. Materiaali otetaan steriilillä pipetillä tai silmukalla ja levitetään liukun keskelle. Toinen lasilasi peittää ensimmäisen siten, että kolmannes ensimmäisestä ja toisesta lasista jää vapaaksi. Lasi pyrkii sivuille. Hanki kaksi isoa aivohalvausta.

Vasten valmistaminen verestä. Veripisara levitetään lasilevyyn kolmanneksen etäisyydeltä vasemmasta reunasta. Sitten erikoisesti maadoitetun lasin reuna, joka kallistaa sen 45 asteen kulmassa, koskettaa veripisaraa. Paina kiillotettua lasia kohteen kohdalle työnnä sitä eteenpäin. Oikein valmistettu tahra on kellertävä ja läpikuultava.

Valmiiden tulosten valmistaminen ruumiiden sisäelimistä ja kiinteän koostumuksen omaavista elintarvikkeista. Elimen tai elintarvikkeen pinta poltetaan kuumalla teräskiinalla ja materiaalista leikataan tästä alueesta. Pinsetit tarttuvat tähän kappaleeseen varovasti ja viipaleen pinta koskettaa liukua kahdessa - kolmessa paikassa, jolloin tehdään useita tahroja, tulosteita.

Katkaise kuivaus

Kuori kuivataan ilmassa huoneenlämpötilassa. Tarvittaessa se voidaan kuivata polttimen liekin lähelle pitämällä lasi vaakasuorassa asennossa reunoilta peukalolla ja etusormella harjaamalla sitä.

Varoitus! Korkeissa lämpötiloissa voi esiintyä solurakenteen häiriöitä.

Smear kiinnitys

Tahrat kiinnitetään täydellisen kuivauksen jälkeen, jotta 1) kiinnitetään mikro-organismit lasisiin; 2) neutraloida materiaali; 3) tapetut mikro-organismit havaitsevat väriä paremmin. Kiinteää pyyhkäisyä kutsutaan huumeeksi.

Kiinnitystavat. 1. Fyysinen - polttimen liekissä: ota lasi pinseteillä tai peukalolla ja etusormella ja kulje kolme kertaa polttimen liekin yläosan läpi 6 sekunnin ajan.

2. Kemiallinen - nestemäisessä muodossa: nestemäiset soluelementit verestä ja tahroista - korkeat lämpötilat aiheuttavat vaikutuksia - tuhotaan, jolloin niitä käsitellään jollakin kiinnitysnesteestä: a) metyylialkoholi - 5 minuuttia; b) etyylialkoholi - 10 min; c) Nikiforovin seos - 10-15 minuuttia; d) asetoni - 5 min; e) hapon ja formaliinin höyryt - muutamia sekunteja.

Väriaineet

Kiinnittymisen jälkeen jatka värjäystä.

Linnoja, muovia, lasia jne. Peitettyjä erikoisvarusteita valmistettuja väriaineita. Pöydälle tarvitset astian, jossa on tislattua vettä; kaksi putkea tai tikkuja, jotka on yhdistetty molemmin puolin kumiputkilla (huumeiden asettamiseksi); pinsetit, sylinterit, pipetit, suodatinpaperi, väriaine, kyky tyhjentää ne. Maalauspöydän on sijaittava lähellä vesihanaa.

Mikro-organismien suhdetta väriaineisiin kutsutaan niiden sivutuotteiksi. Aniliinivärejä käytetään laajasti mikrobiologiassa. Useimmat mikro-organismit ymmärtävät paremmin väriaineita.

Seuraavia värejä käytetään yleisimmin: punainen (perus magenta, hapanta magenta, congo punainen, neutraali punainen); sininen (metyleeni ja toluidiini); violetti (gentian, metyyli, kiteinen); ruskeankeltainen (Vesuvine, Chrysoidin); vihreä (loistava, malakiitti).

Kaikki väriaineet valmistetaan amorfisten tai kiteisten jauheiden muodossa. Niistä valmistetaan tyydyttyneitä alkoholi- ja fenoliliuoksia ja sitten työtä käyttäen vettä sisältäviä alkoholijuomia tai veteen-fenoliliuoksia. Jos käytetään värjättävän väkevöidyn väriainekondensaation aikana, valmiste esipäällystetään suodatinpapereilla, joihin käytetään väriainetta. Samanaikaisesti väriainepalaset jäävät paperille.

Varoitus! Pipettiä levitetään pipetillä niin, että se peittää koko valmistuksen.

Värisävyt

1. Tyydyttyneet alkoholiliuokset (alkuaine):

Seos asetetaan termostaattiin, kunnes se on täysin liuennut useita päiviä. Ravista päivittäin. Säilytetty pulloissa, joissa on maadoitetut tulpat.

2. Carbol Magenta Zylya (haponkestävien mikro-organismien, itiöiden ja kapseleiden värjäämiseen):

Varoitus! Karboliinihappo kaadetaan väriaineeseen eikä päinvastoin.

Seosta ravistetaan voimakkaasti useita minuutteja, suodatetaan ja kaadetaan ampulliin varastointia varten.

3. Fuchsin Pfeiffer (Gram-värjäykseen ja yksinkertaiseen värjäämismenetelmään):

Väriaine valmistetaan välittömästi ennen käyttöä.

4. Carbol gentian violetti (grammaiselle tahraan):

kyllästetystä alkoholiliuoksesta

Gentian Violet - 10 ml

karboliinihappo 5% - 100 ml

Liuokset sekoitetaan ja suodatetaan paperisuodattimen läpi.

5. Lugol-liuos (grammeille ja reagenssitärkkelykselle):

Seos asetetaan pulloon jauhettua lasia, joka on sinetöity ja asetettu päiväksi termostaatissa, ja lisää sitten 300 ml tislattua vettä.

6. Metyleenisinisen alkalinen liuos Leffler:

7. Papereita Sinevissä (Gram-värjäämisessä):

Suodatinpaperin kaistaleet kyllästetään liuoksella ja kuivataan.

Väritysmenetelmät jaetaan indikaattoreihin (yksinkertaisiin) ja erilaisiin (monimutkaisiin), identifioivat bakteerisolun kemialliset ja rakenteelliset ominaisuudet.

Yksinkertainen väritysmenetelmä

Lääke asetetaan seisomaan maalaukseen, koemateriaalia ylöspäin. Pipettiin lisätään väriainetta. Määräajan jälkeen väriaine kaadetaan varovasti, valmistetta pestään vedellä ja kuivataan suodatinpaperilla. Käytä yksinkertaista menetelmää käyttäen yhtä väriainetta. Methylen blue ja alkalinen sininen Leffler maalaa lääke 3-5 minuuttia, Pfeiffer fuchsin 1-2 minuuttia (katso kuvio 4).

Punaista upotusöljyä levitetään värilliseen ja kuivattuun tuotteeseen ja mikroskopisesti käyttäen upotusjärjestelmää.

Monimutkaiset väritystekniikat

Gram-tahra (yleinen menetelmä). Tavallisin differentiaaliväritysmenetelmä on Gram-tahra.

Värjäyksen tulosten mukaan kaikki mikro-organismit jaetaan kahteen ryhmään - grampositiiviset ja gram-negatiiviset.

Grampositiiviset bakteerit sisältävät RNA: n magnesiumsuolaa soluseinässä, joka muodostaa kompleksisen yhdisteen jodin ja päävärin (gentian, metyylin tai kristallivioletin) kanssa. Tätä kompleksia ei tuhota alkoholin toimesta, ja bakteerit säilyttävät violetin värin.

Gram-negatiiviset bakteerit eivät pysty pitämään pääväriaineita, koska ne eivät sisällä RNA: n magnesiumsuolaa. Alkoholin vaikutuksen alaisena väriaine pestään pois, solut värjääntyvät ja värjätään punaisella väriaineella (fuchsin).

1. Huumeella asetetaan paperi sinisellä ja laita muutama pisara vettä tai ratkaisu gentian violetti. Väri 1-2 minuuttia Kuori paperista tai hävitä väriaine.

2. Vedä vettä ilman pesemistä Lugol-liuokseen, kunnes mustaa (1 min), sitten väriaine tyhjennetään.

3. Älä pese vedellä, käytä 96% alkoholia väriaineen tyhjennykseen (30-60 s). Voit laskea lääkkeen alkoholilasiksi 1-2 sekuntia.

4. Pese valmiste vedellä.

5. Maalia Pfeifferin fuchsinilla 3 minuuttia, pese vedellä ja kuivaa.

Mikroskooppinen käyttäen upotusjärjestelmää.

Värjäys Tsilu - Nielsenissä (happoa kestäville bakteereille). Tätä menetelmää käytetään tunnistamaan tuberkuloosin ja lepron bakteerit, joilla on suuri määrä lipidejä, vahaa ja hydroksihappoja solumembraanissa. Bakteerit ovat happamia, emäksiä ja alkoholia kestäviä. Soluseinän läpäisevyyden lisäämiseksi ensimmäinen värjäysvaihe suoritetaan kuumentamalla.

1. Kiinteä valmiste peitetään suodatinpaperilla ja levitetään Zulya fuchsin. Pitämällä lasia pinseteillä, lääke kuumennetaan polttimen liekin päälle, kunnes höyry pääsee purkautumaan. Lisää uusi osa väriaineesta ja lämmitä vielä kaksi kertaa. Jäähdytyksen jälkeen irrota paperi ja pese vedellä.

2. Valmiste hajoaa 5-prosenttisella rikkihapon liuoksella, upottamalla 2-3 kertaa liuokseen tai kaadamalla happoa lasille ja pestä sitten useita kertoja vedellä.

3. Puhdista metyleenisinin vesiliuoksella 3-5 minuuttia, pese vedellä ja kuivaa.

Mikroskooppinen käyttäen upotusjärjestelmää.

Haponkestävät bakteerit muuttuvat punaisiksi ja loput muuttuvat siniseksi (ks. Kuva 4).

Värjäys Ozheshkossa (riidan tunnistaminen). 1. Ilmakuivattuun pintaan kaada muutama tippa 0,5-prosenttista suolahapon liuosta ja lämmitä sitä kunnes muodostuu höyryä. Lääke kuivataan ja kiinnitetään liekin päälle.

2. Maalattu Ziehl-Nielsenin menetelmän mukaisesti. Haponkestävät itiöt värjätään vaaleanpunaiseksi, ja bakteerisolu sinisellä värillä (katso kuvio 4).

Värjäys Burri - Hinsin mukaan (kapselin tunnistaminen). Tätä menetelmää kutsutaan negatiiviseksi, koska valmisteen ja bakteerisolun taustat värjätään ja kapseli pysyy maalaamattomana.

1. Lasilasiin laittaa pisara musta muste laimennetaan 10 kertaa. Se tekee pisaraa kulttuuria. Lasimaalausta käytetään tekemään tahra, aivan kuten veren smear ja kuivattu.

2. Kiinteä kemiallinen keino alkoholilla tai sublimilla. Puhdista varovasti vedellä.

3. Maalata Pfeiffer Fuchsin 3-5 min. Pese varovasti ja kuivaa.

Varoitus! Älä käytä suodatinpaperia estääkseen valmisteen vahingoittumista.

Mikroskooppinen käyttäen upotusjärjestelmää. Valmisteen tausta on musta, solut ovat punaisia, kapselit ovat maalaamattomia (katso kuvio 4).

Mikro-organismien elinikäinen väritys

Elävän viljelyn tutkimiseksi metyleenisinistä ja muista väriaineista käytetään useimmin suurissa laimennoksissa (1: 10 000). Testattavan aineen pisara sekoitetaan lasilevyyn pisaralla väriaineella ja peitetään peitelevyllä. Mikroskooppinen käyttäen 40 x linssiä.

Tutkimus mikro-organismien liikkuvuudesta

Tutkimuksessa, jossa käytetään nestemäisessä ravintoalustassa kasvatettujen bakteerien viljelyä tai bakteerien suspensiota natriumkloridin isotoonisessa liuoksessa.

Murskattu pudotusmenetelmä. Pisara viljelmä pipetoidaan lasilevyyn ja peitetään peitelevyllä. Ilman kuplien muodostumisen välttämiseksi suojalasi on varustettu reunalla pudotuksen reunaan ja alentaa sitä voimakkaasti. Lääkkeen suojaamiseksi kuivumiselta se sijoitetaan kosteaan kammioon.

Märkä kammio on petrimalja, jonka pohjalla on märkä suodatinpaperi. Paperiin asetetaan kaksi ottelua ja valmiste asetetaan niihin. Kansi kansi kansi.

Microscopically suurentaa linssi 40x tummalla kentällä (ks. Luku 2).

Putoamismenetelmä (kuva 8). Lääkkeen valmistukseen tarvitaan lasi, jossa on reikä, suojalasi ja vaseliini. Reiän reunat peitetään ohuella vaseliinikerroksella.

Päällyslasille levitetään pisaraa viljelmää. Pane varovasti peitelevy varovasti niin, että pudotus on keskellä. Liimattu lasi kääntää kantta lasiin nopeasti. Pudotus on hermeettisessä kammiossa ja se säilyy pitkään. Kun mikroskooppi, ensin pieni suurennus (8 ×) löytää pudotuksen reunan, ja sitten suorittaa tutkimus lääkettä suurella suurennuksella.

Testaa kysymyksiä

1. Miten valmistetaan bakteerilenkki?

2. Mitkä ovat tavoitteet ja menetelmät aivohalvauksen vahvistamiseen?

3. Mitkä ovat tärkeimmät väriaineet.

4. Millä menetelmillä tutkitaan mikro-organismien liikkuvuutta?

tehtävä

1. Ota valmiita valmisteita, tutki niitä ja piirrä mikro-organismin perusmuodot.

2. Valmista eri materiaaleista (kulttuuri, pussi, veri, smears-tuloste) olevat tahrat.

3. Värituotteet monimutkaisilla menetelmillä (Gram, Zill - Nielsen, Ozheshko, Burri - Hins).

E. coli gramma tahra

Kuva 1.26. Difteria Corynebacteria-toksigeenisyyden määrittäminen modifioidussa menetelmässä

I - stafylokokit 2 - streptokokkien 3 - sardiini 4 - gonokokkeja 5 - pneumokokki 6 - kapseli pneumokokki 7 - Corynebacterium kurkkumätä 8 - Clostridium 9 - bacillus 10 - Vibrio 11 - spirillae 12 - Treponema 13 - borrelia 14 - leptospira 15 - tinomykeeteiksi 16 - sijoittelu flagella a - monotrichi, b - lofotrichi, in - amphitrihi, ei - vähemmän [c.29]

RPG: tä käytetään laajalti sairauksien diagnosoinnissa. jotka aiheutuvat viruksista, rickettsiaeista ja eksotoksiinia tuottavista bakteereista. Suurella käytännön merkityksellä se on määritettäessä corynebacterium-kurkkumäädän toksigeenisyyttä [C.68]

Mikroskopia. Potilaan materiaalia mikroskopataan vain lääkärin pyynnöstä. Näissä olosuhteissa kuoren tai kalvon limakalvoon purkautuminen poistetaan kahdella tamponilla, joista toinen on tarkoitettu kylvämiseen, toinen - tikkareiden valmistukseen. S. Sirshivpaye omistaa polymorfismin ja ei hyväksy väriaineita hyvin. On mahdollista värjätä tahrat metyyliasetaatti-violetilla, Leffler-sinisellä, toluidiinisillä. Neisserin mukaan gramman mukaan (katso värisävy, kuvio 4). Corynebacterium-diphtheria on yksittäisistä tikkuista muotoiltuja muotoja, jotka on järjestetty kulmassa, kuten kuvio V tai leviävät sormet, vähemmän harvoin ne muodostavat kudoksia, jotka muistuttavat huovutettuja tai sirontapaloja. Värjäyksessä metyyliasetaattilla purppura violetti tai sininen Leffler selvästi havaittu voimakkaasti väriltään [c.203]

Kuva 59. Corynebacterium-diphtherian toksiinien määritys agarissa saostusreaktiossa.

Tangojen päät voidaan katkaista (pernaruttobakilli), pyöristetyt (E. coli), terävä (fusobakteerit) tai paksuuntuminen, ja sitten sauva on samankaltainen kuin kavi (Corynebacterium diphtheria). [P.30]

Helposti kaarevia tikkuja kutsutaan vibriosiksi (cholera vibrio). Suurin osa sauvanmuotoisista bakteereista on epäjohdonmukaisia, koska jakautumisen lopussa solut eroavat toisistaan. Jos solujen jakautumisen lopussa solut pysyvät sidottuna epäspesifisten soluseinämäfragmenttien kanssa eivätkä eroa toisistaan, ne ovat kulmassa toisiinsa nähden (Corynebacterium diphtheria), muodostavat ketjun (pernaruttobakillit). [P.30]

Eroa sen (ensisijainen) ja indusoidun (toissijaisen) fluoresenssin välillä. Primäärisen fluoresenssin avulla esillä oleva kohde sisältää aineita (vitamiineja, pigmenttejä ja muita aineenvaihduntatuotteita), jotka ovat lahjakkaita fluoresoimaan ultraviolettisäteilyllä valaistuna. Useimmilla mikroskooppikohteilla ei ole omaa fluoresenssia, ja sen perusteella niitä käsitellään väriaineilla (fluorokromit), jotka ovat lahjakkaita fluoresoimaan fluoresenssimikroskopian alla. Käytetyt fluorokromit ovat auramiini (Mycobacterium tuberculosis), akridiini keltainen (gonokokit), koryfosfiini (corynebacterium diphtheria), fluoreskeinisotiosyanaatti tai FITC (merkittyjen antiseerumien valmistukseen) jne. [C.10]

Volutin-rakeet voidaan tunnistaa fluoresoivalla mikroskoopilla. Tätä varten lääke värjätään koryfosfiinilla. Keltavihreitä bakteereita, joissa on volutin-oranssi-punainen-rakeet, näkyy mustalla taustalla. Kun tavanomaisia ​​corynebacteria löydetään, ne välittömästi antavat alustavan tuloksen. Mikrobit löydettiin morfologisesti samanlaisiksi kuin Corynebacteria ja tutkimus kestää [C.204]

Kuva 4. Corynebacterium-kurkkumätä, joka on värjätty etikkahapon metyyliviolilla (a) ja Neisserin (b) mukaan,

Gram-tahra on vakava differentiaalinen diagnostinen arvo ja sitä käytetään laajasti mikrobiologiassa. Staphylococcus aureus, streptokokki, difteria corynebacteria, mycobacterium tuberculosis jne. Ovat gram-positiivisia bakteereja. muuttamalla soluseinän rakennetta [c.25]

SZS: n bakteriologiset laboratoriot tutkivat ilmatilaa, vettä, maata, elintarvikkeita ehdollisesti patogeenisten ja patogeenisten mikrofloorien, veden, maan ja ruoan infektioon, suorittamaan tutkimus järjestäytyneistä ryhmistä ja yksilöistä suolistoryhmän patogeenisille bakteereille. Corynebacterium-kurkkumätä, huimaus yskä, parakoklubi, meningokokki. [C.3]

Katso myös termit ja artikkelit:

Pozhozhie ennätys

Artikkelin sisältö1 Mikä hemoglobiinin taso on alhainen?

SISÄLTÖ JA LABORATORIOITUS

AIHE: BACTERIA MORFOLOGIAN TUTKIMUSMENETELMÄT. MIKROSKOOPPINEN TUTKIMUSMENETELMÄ.

LUETTELO VALVONTARKASTUKSISTA

1. Mikro-organismien suojavarusteet. Sporeet, vaiheet ja olosuhteet itiöiden muodostumisesta, biologinen merkitys.

2. Bakteerien kapselit, niiden merkitys.

3. Flagella, niiden rakenne. Cilia. Seksi juonut.

4. Monimutkaiset maalausmenetelmät. Värjäystekniikka Gramille, Zil-Nelsenille, Burri-Hinsille, Neisserille.

5. Mikro-organismeja koskevat tutkimustilat elävässä tilassa. KOH-testi. Menetelmän periaate.

SISÄLTÖ JA LABORATORIOITUS

Gram-tahraustekniikka (ilmoittakaa, mitä värejä bakteerit värjätään Gram-menetelmän jokaisessa vaiheessa / väriä taulukossa)

Bakteerien tärkeimmät morfologiset ryhmät (piirrä väripiirustukset gramman värin mukaan):

1► Staphylococcus-liemi-viljelmän Gram-värjäytymät, E. coli-agar-viljelmä ja niiden seokset. Piirrä huumeita.

2Dephteria-bacillus-salvan valmistaminen, metyleenisin värjäys Lefflerin ja Neisserin mukaan. Piirrä huumeita.

3► CON-testin tulosten tallentaminen ja tallentaminen Staphylococcus aureuksen ja Escherichia colin viljelmillä.

Tulos KOH-testi (3% liuoksella) Staphylococcus aureuksen seinää ei tuhota, Escherichia colin seinämä hajoittaa silmukan taakse ulottuvia silmukoita.

DEMONSTRATION

(ilmoitettava mikroskooppisen värjäyksen menetelmät ja mikro-organismien morfologia - muoto ja sijainti valmistuksessa)

4/12 Vaahto Zil-Nelsenin (tai Ozheshko-menetelmän mukaan), mikroskopian ja luonnoksen mukaan.

Värjäystekniikka Zill-Nelsenin mukaan (ilmoittakaa, missä väreissä bakteerit värjätään jokaisessa värjäysvaiheessa / väristä taulukkoa)

* MT - Mycobacterium tuberculosis; Str - streptokokki.

5► Ziehl-Nelsenillä värjätyt mikro-organismivalmisteiden mikroskopia. Piirrä huumeita.

6► Väriaineen valmistus agar-viljelmästä ruskosklerooman, Burri-Hinsin värjäämisen, mikroskopian ja luonnoksen mukaan.

7Dieputkeen valmistavan "murskatun pudotuksen" tai "roikkuvan pudotuksen" valmistelu opiskelun liikkuvuudelle (mainita valmistemuoto- mikroskopian ominaisuudet)

1) Mikro-organismien suspensio levitetään lasin päälle;

2) Leikkauksen reiän voitelu vaseliinilla ja peitelevyn asettaminen luistiin; 3) Valmiit tuote, mikroskooppisesti upotusobjektilla

Bakteerit (antiikin kreikka βακτήριον - wand) - prokaryoottisten (ydinaseettomien) mikro-organismien ryhmä (valtakunta), useimmiten yksisoluiset. Tähän mennessä on kuvattu noin kymmenentuhatta bakteerilajia, ja niiden oletetaan olevan yli miljoona, mutta lajin käsitteen soveltaminen bakteereihin aiheuttaa useita vaikeuksia.

Spirillae eroavat spiraalin (korkkiruuvi) solurakenteen ja bipolaarisen liuskan järjestelyn kanssa; energiaa he saavat hengittämällä. On olemassa useita genera spirillus. S. volutans - jättiläinen spirillus, joka löytyy aina sian lannasta; hän sai kuuluisuutta "volutin" (polyfosfaatti) löytämisen kautta; puhtaassa viljelmässä se kasvaa vain pienemmällä pitoisuudella 02 (noin 5%), joten sitä olisi pidettävä mikroaerotoleranttina. Spirillum minus, Sodokun aiheuttaja, on rotan purema tauti.

Neisser-menetelmää käytetään tunnistamaan volutiinijyvät. Smeeri värjätään metyleenisin- asetaatilla 2-3 minuutin ajan, jonka aikana väriaineen ja volutinin kemiallinen vuorovaikutus tapahtuu. Väkevät jyvät on maalattu mustaksi. Kun pesu vedellä, solun runko värjääntyy ja sen jälkeen 1 minuutin ajanjakso lisätään Vesuvinin kelta-ruskeaan väriin.

E. coli gramma tahra

Jatketaan mikrobiologista teemaa - bakteerisolujen värjääminen Gram-menetelmällä. Teksti kopioi videon kommentit (yhtäkkiä ei ole mahdollista joku pelata videota, mutta haluan liittyä opetukseen).

Mikrobiologiassa käytetään laajalti erilaisia ​​bakteerivärjäysmenetelmiä. Tietenkin on mahdollista tarkkailla ilman näitä monimutkaisia ​​manipulointeja, mutta sitten mikroskoopilla ei näy mitään, koska bakteerien taitekerroin on lähellä niiden nesteen taitekerrointa, jossa he elävät. Jotta bakteerit tai jotkut niiden sisäisistä tai ulkoisista rakenteista erottuvat selvästi taustalla, käytetään erilaisia ​​väriaineita. Tänään tarkastelemme Gramin väritysmenetelmää, jonka kehitti 1884 tanskalainen lääkäri Hans Christian Gram.

Tekniikan toteutus alkaa mikro-organismien viljelyn kiinteän tahran valmistamisen kanssa. Lasilevyllä käytetään tippa suolaliuosta, johon polt- timen liekissä poltettu mikrobiologinen silmukka viedään tutkittaviin bakteereihin. Tämä voi olla joko hetkellinen kaavinta tai tahra tai ennalta kasvanut siirtomaa. Kaikki vaiheet on suoritettava aseptisissa olosuhteissa, mieluiten polttoliekin alueella. Tekniikan suorittamisen osoitettu menetelmä on tarkoitettu ainoastaan ​​vastaamaan värjäämisen kannalta välttämättömien aineiden käyttöönottoa ja selittämään kunkin vaiheen roolia.

Tekniikan ydin bakteerien visuaalisessa erottamisessa kahteen ryhmään - grampositiivinen ja gram-negatiivinen. Ensimmäinen erottelukyvyn seurauksena ilmestyy mikroskoopilla, joka on väriltään sininen tai violetti, ja jälkimmäinen vaaleanpunaisena. Suurin ero niiden välillä on se, että gram-negatiiviset bakteerit havaitsevat väriaineen huonon, koska kuori on monimutkaisempi. Erityisesti niillä on ylimääräinen kalvo soluseinän yli, joka estää ei-toivottujen aineiden tunkeutumisen. Tällöin peptidoglykaanikerros on ohuempi kuin gram-positiivisten bakteerien. Nämä ominaisuudet antavat heille mahdollisuuden näyttää patogeenisyyttä. Gram-positiivisia bakteereja tuskin tutkitaan lääketieteellisessä mikrobiologiassa, koska hyvin harvat niistä voivat aiheuttaa sairauksia.

Lasin tahra kuivataan ilmassa tai korkealla polttimen liekin yläpuolella kiehumisen ja proteiinin denaturoinnin välttämiseksi ja sen jälkeen kiinteä kulkemalla liekin läpi lyhyeksi ajaksi. Niinpä mikro-organismit kuolevat ja pysyvät tiiviisti lasissa.

Nyt on aika tehdä väriaine. Ensimmäinen, gentian violetti väritys tapahtuu. Tämä on trifenyylimetaanisarjan tärkein väriaine: penta- ja heksametyyliparaosaniliinien seos, jossa on pieni määrä dekstriiniä ja fushsiinia. Sitä käytetään lääketieteessä paitsi väriaineena myös antiseptisenä. Antimikrobiset ominaisuudet selitetään suurella läpäisevyydellä bakteerikalvoilla ja vaikutuksilla redox-prosesseihin.

Väri kestää 1-2 minuuttia, jonka jälkeen gentianvioletti tyhjennetään ja näytteet kaadetaan Lugol-liuoksella. Tämä aine on mielestäni kaikkien tiedossa - niitä käsitellään kurkkukipu ja kurkkukipu. Lugol-liuos on jodin yhdiste, jossa on kaliumjodidia, mikä antaa sille hyvän vesiliukoisuuden. Yhdistämällä bakteerien soluseinien läpi tunkeutuneisiin gentianvioletappaleisiin, jodi muodostaa vahvan sinilevän yhdisteen. Reaktio kestää myös 1-2 minuuttia.

Nyt on tullut aika erilaistumiseen eli gram-positiivisten ja gram-negatiivisten bakteerien erottamiseen. Tällöin lasin, jossa on aivohalvaus, upotetaan useita kertoja astiaan, jossa on 96% etyylialkoholia, kunnes putoavat pisarat ovat samanlaisia ​​kuin lasin alkoholi. Tässä menettelyssä sinivioletti kompleksi pestään pois gram-negatiivisten bakteerien seinistä, jäljellä vain gram-positiivisten seinien seinämissä.

Jotta gram-negatiiviset bakteerit eivät näyttäisi väritön, pesu pestään vedellä ja lisäksi värjätään samana taikaa sisältävällä fuchsiniliuoksella 1-2 minuutin ajan. Koska Gram-positiivisten bakteerien seinämässä on jo väriaine, niitä ei ole värjätty fuchsinilla. Ja gram-negatiiviset bakteerit muuttuvat vaaleiksi. Sido lopulta pestään vedellä, kuivataan ja valmiste on valmis mikroskopiaan.

Micra / Lessons / 2. Menetelmät bakteerien morfologian tutkimiseksi

AIHE: BACTERIA MORFOLOGIAN TUTKIMUSMENETELMÄT. MIKROSKOOPPINEN TUTKIMUSMENETELMÄ.

LUETTELO VALVONTARKASTUKSISTA

Mikro-organismien suojavarusteet. Sporeet, vaiheet ja olosuhteet itiöiden muodostumisesta, biologinen merkitys.

Bakteerien kapselit, niiden merkitys.

Flagella, niiden rakenne. Cilia. Seksi juonut.

Vaikeat väritysmenetelmät. Värjäystekniikka Gramille, Zil-Nelsenille, Burri-Hinsille, Neisserille.

Menetelmät mikro-organismien tutkimiseksi elävissä olosuhteissa. KOH-testi. Menetelmän periaate.

SISÄLTÖ JA LABORATORIOITUS

Gram-tahraustekniikka (ilmoittakaa, mitä värejä bakteerit värjätään Gram-menetelmän jokaisessa vaiheessa / väriä taulukossa)

1. Värjäys gentian violetti (gentian violetti)

(valotusaika 1 minuutti)

2. Käsittely Lugol-liuos

(valotusaika 1 minuutti))

(valotusaika 1 minuutti)

4. Värjäys vedellä magentalla tai safraniinilla

(altistusaika 2 minuuttia))

Bakteerien tärkeimmät morfologiset ryhmät (piirrä väripiirustukset gramman värin mukaan):

1► Staphylococcus-liemi-viljelmän Gram-värjäytymät, E. coli-agar-viljelmä ja niiden seokset. Piirrä huumeita.

(Staphylococcus aureus, Escherichia coli)

2Dephteria-bacillus-salvan valmistaminen, metyleenisin värjäys Lefflerin ja Neisserin mukaan. Piirrä huumeita.

väri tekijällä

väri Neisser

3► CON-testin tulosten tallentaminen ja tallentaminen Staphylococcus aureuksen ja Escherichia colin viljelmillä.

Tulos KOH-testi (3% liuoksella) stafylokokki aureus seinämä ei romahda, Escherichia coli seinän kaatuminen muodostaa silmukan taakse venytteleviä limakalvoja.

Metyleenisini

Tikit, jotka ovat epäsäännöllisiä, satunnaisesti,

Kokkobakteriya - hieman pitkänomainen sauvat

Pyöristetyt päät

Streptobasillit muodostavat kapselin kehossa

(ilmoitettava mikroskooppisen värjäyksen menetelmät ja mikro-organismien morfologia - muoto ja sijainti valmistuksessa)

4/12 Vaahto Zil-Nelsenin (tai Ozheshko-menetelmän mukaan), mikroskopian ja luonnoksen mukaan.

Värjäystekniikka Zill-Nelsenin mukaan (ilmoittakaa, missä väreissä bakteerit värjätään jokaisessa värjäysvaiheessa / väristä taulukkoa)

Väritä riita Ozheshko

Ei-kiinteällä tahralla levitetään 0,5-prosenttista HCl-liuosta ja kuumennetaan 1 - 2 minuutin ajan ramenien päälle, pestään vedellä, kiinnitetään ja katso alla.

Värjäys haponkestävät bakteerit

1. käsittely Suodatinpaperi on täynnä Zielyan karboli-fuchsinia ja kuumennetaan hammaslampun liekillä, kunnes höyry erotetaan.

(valotusaika ennen höyryn purkausta )

Tarvitaan myös poista paperi huuhtele, huuhtele vedellä

3. Värjäys metyleenisinvärisenä vesiliuoksena

(valotusaika) 3-5 minuuttia

* MT - Mycobacterium tuberculosis; Str - streptokokki.

5► Ziehl-Nelsenillä värjätyt mikro-organismivalmisteiden mikroskopia. Piirrä huumeita.

Väritys Ziehl-Nelsenu.

Mycobacterium tuberculosis yskös

Väritys Ziehl-Nelsenu.

6► Väriaineen valmistus agar-viljelmästä ruskosklerooman, Burri-Hinsin värjäämisen, mikroskopian ja luonnoksen mukaan.

Väritys Burri-Hinsin mukaan

7Dieputkeen valmistavan "murskatun pudotuksen" tai "roikkuvan pudotuksen" valmistelu opiskelun liikkuvuudelle (mainita valmistemuoto- mikroskopian ominaisuudet)

Mikro-organismien suspensio levitetään lasin päälle;

Leikkauksen reiän voitelu vaseliinilla ja peitelevyn asettaminen luistiin; 3) Valmiit tuote, mikroskooppisesti upotusobjektilla

Bakteria (Antiikin Kreikan. βακτήριον - wand) -ryhmä (valtakunta)prokaryoottiset(ydinaseettoman)mikro-organismit, useimmitencelled. Tähän mennessä on kuvattu noin kymmenestä tuhannesta.lajibakteerit, ja oletetaan, että on olemassa yli miljoona, mutta lajin käsitteen soveltaminen bakteereihin liittyy useisiin vaikeuksiin.

Spirillae eroavat spiraalin (korkkiruuvi) solurakenteen ja bipolaarisen flagellan kanssa; energiaa he saavat hengittämällä. On olemassa useita genera spirillus. S. volutans - jättiläinen spirillus, joka löytyy aina sian lannasta; hän sai kuuluisuutta "volutin" (polyfosfaatti) löytämisen kautta; Puhtaassa viljelmässä se kasvaa vain pienemmällä pitoisuudella 02 (noin 5%), joten sitä olisi pidettävä mikroaerotoleranttina. Sodoku-valmisteen aiheuttama Spirillum minus on rotan purematauti.

Neisser-menetelmää käytetään tunnistamaan volutiinijyvät. Smeeri värjätään metyleenisin- asetaatilla 2-3 minuutin ajan, jonka aikana väriaineen ja volutinin kemiallinen vuorovaikutus tapahtuu. Väkevät jyvät on maalattu mustaksi. Kun pesu vedellä, solun runko värjääntyy ja sen jälkeen 1 minuutin ajanjakso lisätään Vesuvinin kelta-ruskeaan väriin.

Ziehl-Nielsenin menetelmä on suunniteltu erottamaan haponkestävät bakteerit (tuberkuloosin ja lepron aiheuttavat aineet) ei-haponkestävistä.

Leima värjätään Tsielyan karboliiniputkilla (perusväriaine) kuumentamalla 3-5 minuuttia.

Huuhtele rikkihapon (erilaistusaineen) liuosta 1-2 minuutin ajan.

Maalaa 3-5 minuuttia metyleenisinistä (lisäväri).

Haponkestävien bakteerien soluseinämällä on suuri lipidipitoisuus. Niitä on vaikea värjättää, mutta säilyttävät tärkeimmät väriaineet hapon värjäytymisen yhteydessä. Happamattomia bakteereja tahraantuu helposti ja sitten helposti hiutuvat hapolla ja värjätään lisävärillä.

Ozheshko-menetelmä on samanlainen kuin Ziehl-Nielsen-menetelmällä, mutta eroaa suolahappoliuoksen käytön mordanttina, löyhästi spore-kalvoa, joka ei havaitse väriaineita hyvin. Värjäyksen jälkeen kloorivetyhapolla, kun sitä kuumennetaan 2-3 minuuttia, tahra kiinnittyy ja värjätään Ziehl-Nielsen -menetelmän mukaisesti. Samaan aikaan solun sytoplasma muuttuu siniseksi ja itiöt muuttuvat punaisiksi.

Burri-Hins-menetelmää käytetään kapsulaaristen bakteerien tahraamiseksi ja se perustuu siihen, että kapseli ei tunnista väriaineita. Kapseli paljastuu Storm-taustan negatiivisella kontrastilla. Tätä varten musta muste sekoitetaan viljelmään ja kuivataan. Sen jälkeen ne kiinnitetään polttimen liekkiin, värjää mikrobien solujen kappaleet Hinsin mukaan - vesipitoisella fuchsinilla 1 minuutin ajan ja pestään vedellä 5-10 sekunnin ajan. Tuloksena on väritön kapseli ja pienten mikrobien rungot, jotka ovat selvästi näkyvissä tumman taustan alla.